Nature Biotechnology：新的CRISPR-Cas方法带来更精确的DNA切割

　　

由马萨诸塞州总医院(MGH)的研究人员领导的一个团队已经克服了通过CRISPR-Cas酶和其他技术切割和编辑DNA的主要限制。最近的这项创新发表在《自然-生物技术》杂志上，它将简化和加快分子克隆方法，并扩大它们的用途。

CRISPR-Cas编辑已经改变了研究人员改变DNA的能力——例如，用限制性内切酶或从细菌中分离的蛋白质无法做到的方式切割特定的DNA序列，而这种蛋白质已经被用于切割特定位点的DNA序列几十年了。尽管CRISPR-Cas工具可以被编程定位和切割几乎任何DNA序列，但其定位的一个主要限制是要求首先识别位于目标侧翼的短序列，称为原间隔相邻基序(PAM)。因此，DNA以前只能在这个特定基序的侧面被切割。

在这项最新的研究中，该团队之前设计了一个几乎没有PAM的CRISPR-Cas9变体，名为SpRY，测试了其作为通用DNA切割工具的效用。

通过设计SpRY和导向RNA (gRNA)复合体，在实验室实验中靶向超过130个DNA序列，科学家们惊奇地发现，SpRY在体外是无PAMless的，可以有效地切割由gRNA编程的任何序列的DNA。研究人员还表明，他们的技术可以克服限制性内切酶的局限性。

“我们证明，SpRY DNA消化（sprygests）使DNA切割几乎在任何序列，包括广泛的范围内，以前不能用限制性内切酶或其他CRISPR-Cas蛋白质的目标，”资深作者Benjamin kleinstver博士说，他是麻省总医院基因组医学中心的助理研究员和哈佛医学院的助理教授。“这种新方法允许研究人员在试管中选择任何DNA位置切割DNA。SpRYgests提供的新功能将加快并降低各种基础研究应用的成本，包括可能最终产生临床影响的研究。”

研究人员设想，SpRYgests可以广泛应用于简化典型的分子克隆方法、更复杂的克隆方法、组装下一代测序库和许多其他方法。

这项研究是由博士后Kathleen a . Christie博士领导的，她发誓再也不会使用限制性内切酶了。其他合著者包括，Jimmy A. Guo, Rachel A. Silverstein, Roman M. Doll, Megumu Mabuchi, Hannah E. Stutzman，林杰聪，马林源，Russell T. Walton, Luca Pinello和G. Brett Robb。

这项工作得到了美国国立卫生研究院和美国国家科学基金会的支持。

原文标题：

Precise DNA cleavage using CRISPR-SpRYgests