Takara支原体检测试剂盒,让污染无处遁形

【字体: 时间:2022年05月25日 来源:Takara

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  定期进行支原体检测,在无支原体存在的细胞培养体系内才能获得稳定、准确、且有效的实验数据。

       确保无污染的细胞培养体系已经成为了细胞研究的基础条件,在细胞培养过程中,让人头疼的就是一直受到支原体污染的困扰,支原体污染会对细胞培养造成诸多方面的不良影响,这俨然已经成为在细胞培养时的一个严重问题。

       因此,定期进行支原体检测,在无支原体存在的细胞培养体系内才能获得稳定、准确、且有效的实验数据。

       为了确保细胞培养生物制品的质量和安全性,各国对此都作出了明确的要求:

1. 中华人民共和国药典规定,主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞应进行支原体检测。
2. 美国食品药品监督管理局(FDA)强烈建议,应该用合适的方法检测细胞的支原体污染状况。
3. 欧洲药典(European Pharmacopoeia) 2007年版规定对细胞治疗产品需要进行严格的支原体检测,允许使用荧光定量PCR的核酸扩增法进行检测,并规定了相关检出量标准。

什么是支原体(Mycoplasma)

       支原体是目前已知的最小可自主生存的生物体,是哺乳动物细胞培养中的常见污染源,又称霉形体,直径约在0.1-0.3 μm,是目前发现的最小的、最简单的原核生物,可以轻松地通过滤膜,混入培养系统中,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。

       支原体没有刚性的细胞壁,通常依附在细胞膜表面,因此普通的抗生素对它根本不起作用,实验室常见的种类有:口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、人型支原体、唾液支原体、肺支原体和梨支原体等。

支原体污染的后果

        细菌和真菌造成的污染相对比较容易检测、预防和去除,然而支原体造成的污染很难察觉,即使生长密度高达 107-109 CFU/mL,也很难有污染迹象。

        支原体污染后会导致细胞生长变慢,状态变差,不会马上使细胞致死,但会影响细胞内的各种参数,如改变细胞膜抗原性,改变细胞新陈代谢,干扰核酸的合成,改变 DNA 转染效率,导致染色体畸变等。

典型的支原体污染来源

1. 实验室工作环境中存在污染源;
2. 所使用的相关实验器材污染;
3. 培养基及相关试剂污染;
4. 培养的细胞间交叉污染;
5. 未执行标准的无菌操作流程。

细胞遇到支原体污染,怎么办?Takara支原体检测试剂盒帮您解决支原体污染问题

◆  TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set…………………Takara Code:6601

       本制品是一种 Primer Set,用于使用 PCR 方法检测细胞培养等生物材料中污染的支原体。 通过使用本制品,在编码16S和23S rRNA的DNA上设计一对F1/R1引物,扩增编码16S和23S rRNA的 DNA间隔区,然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条F2引物,在编码23S rRNA的DNA上设计一条R2引物进行套式PCR。

        可以通过仅数小时的PCR扩增和电泳检测扩增条带来实现常规培养方法中需要一周时间才能完成的的支原体检测,并且容易获得判断结果。

       在本制品中,可以对 11 种支原体属以及尿素原体 (UreaPlasma) 属中的一种进行高灵敏度检测,当与单独出售的TaKaRa Taq (Takara Code:R001)或 TaKaRa Ex Taq(Takara Code:RR001)一起使用时,该制品可以轻松实现高效率检测。 温馨提示,Matchmaker系列产品搭配使用,并严格按照实验说明书操作,实验效果更好呦!

◆ 使用本Kit通过PCR扩增及电泳分析进行支原体检出仅需数个小时。
◆ 操作方便简单。
◆ 兼具高灵敏度与高特异性。


PCR法检测支原体的原理


Primer 序列及与之相对应的支原体 DNA 序列
(·)表示与引物序列相同的碱基
(-)表示不含 primer 的碱基序列

CycleavePCR™ Mycoplasma Detection Kit……………[Takara Code:CY232]

        本制品是一种利用实时荧光定量PCR装置对支原体进行特异性检测的试剂盒,可特异性针对支原体的16S rRNA基因实现高感度地检测出培养细胞中至少10种支原体(M. arginini, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium, M. fermentas, M. bovis,M. arthritidis,M. pirum,M. pneumoniae) 以及Acholeplasma属中的1种 (A. laidlawii)。

       试剂盒内包含了检测所需的探针/引物mix、PCR酶mix、阳性对照,以及用于分解其他干扰蛋白的蛋白酶K,组分齐全。

       试剂盒的扩增反应使用改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增,大大提高PCR的检测灵敏度。

       同时本制品采用Cycling Probe法进行检测,使用的探针是与支原体16S rRNA碱基互补的RNA,可针对支原体进行高灵敏度的特异性检出。

【Cycling Probe法原理】

        Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法,能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。

        Cycling Probe内部含有RNA碱基,一端标记荧光物质,另一端标记荧光淬灭物质,当探针处于完整状态时,由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光,但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后,RNase H在RNA部分将探针切断,淬灭抑制作用解除,荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度,能够实时监控扩增产物量。如果探针的RNA部分与模板不匹配,RNaseH就不能在RNA部分将探针切断。

        CY232试剂盒的过人之处就在于所使用的探针是与支原体16S rRNA碱基互补的杂合探针,因此可针对培养细胞中至少10种支原体进行高灵敏度的特异性检出。

 

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