聚焦等温扩增,LAMP检测轻松做!

【字体: 时间:2022年07月14日 来源:基因有限公司

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  等温扩增方案多种多样,并各具优势。通常等温扩增反应时间非常快,并且不需要热循环仪,这使其特别适合现场检测和即时诊断。

环介导等温扩增
WarmStart® LAMP

聚合酶链反应(PCR)是特定 DNA 扩增技术,已被广泛应用。然而,PCR 需要反应混合物在不同温度之间重复循环才能实现扩增,因此,在分子生物学和分子诊断实验室中还有其它序列特异性扩增方法,也像 PCR 技术一样,常被使用。这些替代方法通常不需要改变反应温度,因此被称为等温扩增。等温扩增方案多种多样,并各具优势。通常等温扩增反应时间非常快,并且不需要热循环仪,这使其特别适合现场检测和即时诊断。等温扩增已成功应用于诊断领域,在商业分子诊断平台中占据举足轻重的地位。

LAMP--环介导等温扩增

1 概述

LAMP 通过 4-6 个引物来识别目标 DNA 的 6-8 个不同区域。使用具有置换活性的 DNA 聚合酶进行反应,其中两个引物形成的环结构可引发后续的扩增反应。

▪ 反应温度:65°C
▪ 扩增子长度:<250 nt
▪ 扩增产物:长片段,有分支

2 优势

LAMP 具备快速、灵敏、扩增能力大等特点,通过肉眼即可观察到反应过程中产生的焦磷酸镁沉淀,因此 LAMP 非常适合现场诊断。

NEB:LAMP诊断原料的开拓者和实力担当

▪ LAMP诊断原料的开拓者
▪ 全球首个Bst LF酶供应商
▪ Bst酶持续开发的引领者
▪ 清晰可视变色法的开发研究者
▪ 稳定的产能、严谨的质控

WarmStart® LAMP

环介导等温扩增 (LAMP) 的简单一步解决方案

1 WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix with UDG

▪ 含 UDG 的 WarmStart® LAMP 变色预混液是由Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart® RTx 反转录酶在特殊的低缓冲力反应溶液中优化形成,其原理为 DNA 聚合酶在 LAMP 扩增反应中产生大量质子,引发 pH 值的下降,从而使反应液颜色从粉红色变为黄色。

▪ 预混液中包含的 dUTP 和 UDG 可有效减少反应间的残留污染。
▪ 该预混液即可用于 LAMP 也可用于 RT-LAMP 反应,仅需加热装置及样品,即可在 15-40 分钟内肉眼判定阳性结果。

2 WarmStart® Multi-Purpose LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (with UDG)

▪ 兼容不同的样品类型并支持多种检测方法


▪ 包含 UDG 和 dUTP 降低残留污染的风险
▪ WarmStart® RTx 反转录酶室温建立反应体系

3 Bst DNA聚合酶

▪ 超强性能--DNA等温扩增,链置换活性强
▪ 适应性强--可以用于富含GC区域的DNA扩增
▪ 温度范围广--在宽温度范围内具有活性
▪ 独特温启动--Bst 2.0 WarmStart 可在室温下建立体系

4 WarmStart RTx 反转录酶

WarmStart RTx 反转录酶(NEB#M0380)是一种以 RNA 为模板的 DNA 聚合酶,通过可逆结合的适配体,可在 40℃ 以下抑制反转录活性。该酶能以 RNA(cDNA 合成)或单链 DNA 作为模板,以引物为起始合成互补的 DNA 链。RTx 在 RNA 扩增检测中表现优异,特别适合用于LAMP实验。

▪ 温启动性能 - 第一款商业化的温启动反转录酶,可在室温下建立体系
▪ 耐高温 - 50℃ 至  65℃ 均有良好活性,可在 65℃ 下一步完成 RT-LAMP 实验
▪ 快速 - 10min 即可完成反转录实验
▪ 灵敏 – RT-LAMP 检测下限为 0.1 pg RNA,cDNA 合成验检测下限为 1 pg RNA

5 LAMP Fluorescent Dye

LAMP 荧光染料是一种核酸嵌入染料,可通过荧光值的测量实现 LAMP 反应的实时检测。

▪ 专门适用于等温扩增 LAMP检测 的荧光染料
▪ 为 WarmStart® LAMP 试剂盒 (DNA & RNA) (NEB #E1700) 的组分之一
▪ 该产品足以用于至少 500 次反应
▪ 普通荧光定量检测仪器,请选择 SYBR®/FAM 检测通道

NEB  “知行加速跑”夏季促销- WarmStart® LAMP产品热卖中

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