蛋白Marker知多少∣值得入手的蛋白Marker

【字体: 时间:2022年08月23日 来源:基因有限公司

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  Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白Marker还有显示转膜是否成功、以及蛋白在凝胶上的电泳程度等作用,因此选择正确的蛋白Marker也是Western Blot实验成功的必要条件之一。

做Western的小伙伴都会用到蛋白Marker,但很多人对于蛋白Marker的了解并不是很清楚,比如Marker都有哪些类型?分子量范围都有多少的?预染蛋白Marker和未预染的有什么区别?面对市面上琳琅满目的蛋白Marker,该怎么选择?

蛋白Marker定义和用途

蛋白Marker:即蛋白分子量标准,是一些已知分子量的蛋白质的混合物,像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。

在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是其中小小的一环,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白Marker还有显示转膜是否成功、以及蛋白在凝胶上的电泳程度等作用,因此选择正确的蛋白Marker也是Western Blot实验成功的必要条件之一。

蛋白Marker的分类

总体来说,目前最常用的蛋白Marker分为非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker。

非预染蛋白Marker

非预染蛋白Marker是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液,方便不同大小的蛋白比较。非预染的Marker使用上不如预染Marker好用,因为电泳过程中完全看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示参照作用,属于“后知后觉”型的。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以比较准确,可以精确判断蛋白大小。

预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。

预染蛋白Marker

预染蛋白Marker是纯化好的一些蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。

预染蛋白Marker的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处,如果使用预染Marker就可以预测目标蛋白进入最佳分辨区时停止电泳以得到最佳分辨效果;如果观察到Marker电泳异常也可以及时终止电泳;另外在Western Blot转膜以后可以直接观察蛋白转膜是否完全,还可以在膜上标记蛋白分子量,所以吸引了许多实验室人员购买预染蛋白标准。

值得注意的是,预染蛋白Marker与染料共价耦联,所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化,可能导致一些偏差,所以不太适合精确定位蛋白——不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样,我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小,最后都需要Western来定性,所以如果不是要区分大小相近的条带,预染Marker还是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。

预染蛋白Marker的分类

预染蛋白Marker又分:单色预染和多色预染,单色预染蛋白Marker通常会利用其中某些条带加倍浓度加深某些条带的粗细,来提示其大小的,方便我们快速记忆和区分各个条带的大小。而彩色蛋白Marker则用不同的颜色来区别,就更加好辨认啦。而且如果沉闷的电泳实验中跑出多彩的彩虹Marker,此时心情想必会愉快一些!

除了上面介绍的,市面上还有一些其他类型的蛋白Marker:如荧光蛋白Marker、生物素化Marker、显影蛋白Marker等…。

此外,蛋白Marker按分子量范围又分为高分子量、低分子量、宽分子量几类。检测大分子量蛋白经常使用到高分子量范围Marker,检测小蛋白甚至是一些多肽常会用到小分子量范围Marker。如果从整个实验室考虑,选宽分子量、条带分布比较均匀的Marker,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断。

Q: 蛋白marker的种类真多啊!自己选起来好麻烦。有没有很经典实用、使用广泛、且性价比好的推荐?

A:有的,安排!

值得入手的蛋白Marker

1.GeneTech 三色预染蛋白marker
--常规范围,经典传承(10-180 kD)

GeneTech 三色预染蛋白Marker是由三种颜色(红、绿、蓝)的10 种不同分子量的蛋白组成。因其分子量分布范围符合大部分科研工作者习惯,产品一经上市,便得到大家的认可!

产品特色:

宽分子量范围——10种10K-180K的重组蛋白组成
清晰准确,易于观测——条带清晰锐利, 分布均匀,三色预染,亮度相似
即用型——无需稀释,无需煮沸、无需添加还原剂
成本低廉——仅需极少量即可完美呈现Marker条带
兼容化学发光&近红外荧光——成像方式:目测比色、近红外 (NIR) 荧光(700nm 通道,蓝色条带)、RGB 荧光(550nm 通道,橙色条带)

2.SMOBIO ExcelBand三彩预染蛋白marker(PM5100)
--更宽范围,满足大部分分子量需求(10-245 kD)

产品特色:

即用型产品;
内含14条预先染色的蛋白质条带,片段范围涵盖10 kDa至245 kDa,满足大部分分子量需求;
高性价比;
现货。
 
3.CST Color-coded 预染蛋白Marker #12949
 --高范围,高分子量(43-315 kDa) 大分子轻松标记

产品特色:
最高315 kDa,大分子量准确指示;
共价结合蓝色、绿色、橙色或粉色染料的纯化蛋白混合物,经电泳后会分解为介于 43 和 315 kDa 之间的 8 种条带;
蛋白浓度已经精心平衡,以获得均匀的强度。
 
4.CST Color-coded 预染蛋白Marker #13070
--低范围,低分子量 (1.7-42 kDa)小分子轻松标记

产品特色:
最低1.7 kDa,小分子量准确指示;6条带;蛋白浓度已经精心平衡,以获得均匀的强度。
 
5.非预染蛋白Marker 和生物素化蛋白ladder
--样品分子量精确判断;最低调的标准Marker

    

非预染蛋白 Standard(NEB #P7717)用于样品分子量精确判断;

生物素化Marker 套装(CST #7727)包括生物素化的蛋白标准品和 Anti-biotin, HRP-linked Antibody。使用辣根过氧化物酶 (HRP) 的蛋白质印迹检测系统时,生物素化蛋白标准品检测包可检测蛋白质印迹上的分子量标准品。

分子量标准品是一种可共价结合生物素的纯化蛋白混合物,可分解成分子量范围介于 9-200 kDa之间的 10 条带。该抗生物素抗体在蛋白质印迹实验中可用于检测生物素化的蛋白梯度。包装已经优化,适用于化学发光蛋白质印迹检测流程。

小结

如上这几款蛋白Marker涵盖了我们实验中绝大部分需求,是非常实用、非常值得入手的几款蛋白Marker,都是即用型,具有条带分明、清晰可见、分子指示精准等特点,而且设计人性:单色、彩色型,可快速辨识。

✦ 如上几款蛋白Marker产品列表 ✦

如有任何问题,欢迎联系如下产品专员

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