血液直扩新助力,NEB Q5系列新品重磅来袭!

【字体: 时间:2022年08月26日 来源:基因有限公司

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  血液中存在着多种 PCR 抑制物,包括血红素、蛋白、盐和抗凝剂,一般的聚合酶不适合直接进行血液中的基因检测。今天,小编给大家介绍一款 NEB 重磅新品。

血液中存在着多种 PCR 抑制物,包括血红素、蛋白、盐和抗凝剂,一般的聚合酶不适合直接进行血液中的基因检测。

因此血液样本在进行PCR扩增时,就需要先经过DNA的提取和纯化,这无疑也成为了影响PCR检测效率的关键。

今天,小编给大家介绍一款 NEB 重磅新品:

NEB Q5® 血源直扩 2X 预混液(M0500)


Q5® Blood Direct 2X Master Mix
无需 DNA 提取纯化

人全血/干血斑样品直扩
热启动+超保真
抑制成分耐受度+++

1 产品特点

▪ 无需 DNA 纯化,可直接使用人全血细胞或干血斑样品进行扩增
▪ 通过 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶进行精准、高效的 PCR
▪ 优化的缓冲液系统有效提高对扩增抑制成分和化学品的耐受度
▪ 适配体抑制酶活,为室温下建立反应体系奠定基础

2 产品信息

▪ 该预混液包含 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶,一种热稳定的 DNA 聚合酶,具有 3'→ 5' 外切核酸酶活性,能提供稳健的 DNA 扩增和低错误率。
▪ 优化的 dNTP 缓冲液有效提高了对血液中扩增抑制成分、抗凝剂以及滤纸上化学品的耐受度。
▪ 该产品能够从含有 EDTA 钠盐、EDTA 钾盐、枸橼酸钠和肝素钠的全血细胞以及从保存在普通防腐滤纸上的血样品中扩增长达 7.5 kb 的片段。


NEB's Tm Calculator

建议使用Tm Calculator 针对于感兴趣的聚合酶/缓冲液确认引物的最适退火温度。

3 产品性能展示

3.1  性能卓越,能直接扩增全血或干血斑

根据说明书推荐的标准反应条件,使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液进行 35 个循环的 PCR 扩增。使用 LabChip® 微流控分析仪对产率和纯度进行定量,结果分别以圆点的大小和颜色展示:圆点面积越大、绿色越深,则表示扩增性能越强。

A. 以 10% EDTA 保存的人全血为模板,扩增人基因组不同靶标(0.3 至 7.5 kb)。结果以模拟胶图(上)和相应的点图(下)呈现。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液在较大范围的模板长度区间内均表现良好。

B. 以全血(上)或滤纸干血(底部)为模板,对人类基因组靶标(604 bp)进行扩增。人全血占总反应体积 (50 µl) 的 5-30%。将未经处理的 1 mm 打孔干血斑直接添加到 25 µl 反应体系中(每个反应一个打孔样品)。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液对不同的全血含量、防腐剂和各种类型的采血卡纸具有广泛的耐受性。

3.2 对各种靶标序列均能高效扩增

使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液和其它几种市售血液直扩聚合酶,分别对不同 GC 含量 (23-77%)(A 图)和不同长度(2 -7 kb)(B 图)人类基因靶标进行 PCR。以 10% EDTA 保存的人全血为模板。根据说明书建议使用 50 µl 反应体系进行热循环。使用 LabChip® 微流控分析仪进行定量,结果分别以圆点的大小和颜色表示产量和纯度。结果显示:Q5® 血源直扩 2X 预混液对于各种类型的靶标均表现优异。

3.3 各种滤纸/血液防腐剂/反应体系中表现稳定

根据说明书推荐的标准反应条件,使用 Q5® 血源直扩 2X 预混液对干血中的人类基因组靶标(604 bp)进行 PCR。将不同抗凝剂抗凝的血样采集于 Whatman 903 或 FTA Elute 卡纸上,在上述干血卡纸打孔,分别直接加入到 20、25 或 50 µl 反应体系中。结果显示:在各种体积的反应体系、抗凝剂或滤纸类型中,均能达到稳健扩增。

今天的新品介绍就到这里啦
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