干货 | 基因治疗最新案例分享！是什么影响了你的转染效率？！

基因治疗Gene Therapy

最新案例：

Nature Medicine：AAV基因治疗酗酒，可防止酒瘾复发

2023年8月14日，俄亥俄州立大学、俄勒冈健康与科学大学、维克森林大学医学院、加州大学旧金山分校的研究人员在Nature Medicine上发表了题为：GDNF gene therapy for alcohol use disorder in male non-human primates 的研究论文。在这篇文章中通过将编码人神经胶质源性神经营养因子(AAV2-hGDNF)的腺相关病毒血清2型载体(一种增强多巴胺能神经元功能的生长因子)注入非灵长类动物的中脑腹侧被盖区VTA，这种行为调节抵消了与慢性酒精使用相关的低多巴胺能信号状态，也就意味着这种治疗可以防止戒酒后的酒瘾复发，可能为严重酒精成瘾（也称为酒精使用障碍，俗称酗酒）患者提供一次性、持续的治疗。

Molecular Therapy：开发渐冻症的AAV基因治疗新方法

2023年9月27日，上海科技大学生命科学与技术学院罗振革团队在期刊发表了题为：Intrathecal delivery of AAV-NDNF ameliorates disease progression of ALS mice的研究论文，该研究报道了一种全新的肌萎缩侧索硬化症（ALS）基因治疗策略。经过前期探索和挖掘，研究组聚焦神经细胞源性神经营养因子NDNF，优化并构建了基于腺相关病毒AAV-NDNF表达载体，采用脊髓鞘内注射手段，实现了NDNF在脊髓及全脑的大范围神经细胞转染。信号通路分析结果表明，AAV-NDNF注射显著激活细胞存活相关信号通路，抑制细胞死亡相关信号通路，而且抑制炎症相关信号通路。因此，通过AAV鞘内递送NDNF展现了作为ALS基因治疗策略的潜力。

Nature Communications：AAV介导改善视网膜色素校正效率高达49%

2023-08-21 报道，在Nature Communications上发表了题为AAV-mediated base-editing therapy ameliorates the disease phenotypes in a mouse model of retinitis pigmentosa 的研究论文，该研究利用携带 RP 致病突变的 rd10 小鼠模型，证明通过双 AAV 系统递送腺嘌呤碱基编辑器可纠正神经视网膜中的致病单核苷酸变异（SNV），且效率高达 49%。

基因治疗近年来高速发展，它旨在从基因层面来对致病基因进行纠正、改造和影响。因此，利用瞬转的方法将质粒导入到HEK293等细胞中进行重组病毒表达已经广泛应用在细胞和基因治疗领域。

影响质粒转染效率因素

1. 质粒超螺旋结构

质粒拓扑结构对转染和表达效率的影响近来受到了一些关注。在瞬时转染过程中，具有超螺旋(sc)结构的 pDNA通常被认为比开环(oc)和线性化（linear）的DNA具有更高的转染效率，质粒的超螺旋水平也成为了工艺开发过程中一项重要的质量标准。

因此，保护质粒的超螺旋结构对提高转染效率也有一定的作用。

2. 质粒内毒素含量

除了质粒的超螺旋结构对细胞转染效率有影响外，内毒素含量也会极大程度的影响转染率和细胞存活力。同时内毒素还可能激活免疫细胞的非特异反应，造成实验中的假阳性。

因此，为了保证高转染率和转染细胞高存活率，需在质粒制备的过程中就尽可能的降低内毒素含量。

NucleoBond® Xtra Midi / Maxi EF

来自有着近百年滤纸技术和近60年色谱技术的德国MN（MACHEREY-NAGEL）。采用二代阴离子交换树脂技术术和裂解液澄清方式相结合，质粒质量更高。重力过滤和过柱，无需离心，减少了离心力对质粒超螺旋结构的影响。

 

内毒素敏感型真核细胞高效转染Huh-7 细胞使用Lipofectamine® 2000 reagent(Life Technologies)进行转染。NucleoBond® Xtra Midi EF 抽取的质粒转染后的细胞活力和对照组（treatment w/o DNA)转染后的细胞活力一样。因此，NucleoBond® Xtra Midi EF kit 试剂盒提取的质粒不影响细胞活力。相反，普通分子级质粒抽提试剂盒提取的质粒可以引起细胞活力的降低。

如果您转染细胞活力差，效率低，NucleoBond® Xtra系列可以很好的为您提供解决方案！

基因有限公司作为MACHEREY-NAGEL的全国一级代理，可为您提供针对不同类型样本，例如血液、组织细胞、植物、真菌、土壤、粪便等的DNA和RNA核酸抽提解决方案。

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