叶绿素含量测定另辟蹊径——NanoDrop自定义方法

NanoDrop One/OneC

叶绿素a是将光能转化为化学能的主要色素，叶绿素b是将吸收的光转移到叶绿素a的辅助光合色素。叶绿素定量在植物生物学、环境科学、生态毒理学、疾病预防和医学药物等众多学科中都很有价值。

NanoDrop One/OneC 超微量分光光度计可用于测量叶绿素的吸光度。叶绿素a和叶绿素b分别在不同波长下有吸收高峰。叶绿素a在433nm和666nm波长下有吸收高峰，叶绿素b在462 nm和650nm波长下有吸收高峰。NanoDrop One/OneC的自定义程序可用于检测叶绿素a和叶绿素b的光谱并确定其主要吸光度。

01 实验方法

样品制备

将菠菜中的叶绿素 a 和叶绿素 b 分别溶解在 100% DMSO（二甲基亚砜）中，0.5倍倍比稀释，分别得到四个浓度梯度的叶绿素 a 和叶绿素 b 样品。样品在-20°C下避光保存。

吸光度测定

在公式表中输入自定义公式，检测叶绿素a和叶绿素b在分析波长处的吸光度，并计算叶绿素a和叶绿素b的浓度。并在全光谱扫描中确定峰的位置。公式取自 Barnes 等人(1991)。

chlorophyll a

chlorophyll b

叶绿素 a 和叶绿素 b 的吸收光谱。叶绿素 a 在 433 nm 和666 nm 处的吸收高峰(上图)。叶绿素 b 在 462 nm 和 650 nm处的吸收高峰(下图)。

注：如果您使用的是DMSO以外的溶剂，我们建议您使用自定义模块来识别样品的最大峰，并相应地修改自定义方法。

02 实验结果

叶绿素a

使用自定义方法测定不同浓度梯度下菠菜叶绿素 a 的吸收光谱。叶绿素 a 在 433 nm 和 666 nm 处显示出吸收高峰。

实验测定出叶绿素 a 含量，每个样品重复三次。

叶绿素b

使用自定义方法测定不同浓度梯度下菠菜叶绿素 b 的光谱。叶绿素 b 主要在 462 nm 和 650 nm 处出现吸收高峰。

实验测定出叶绿素 b 含量，每个样品重复三次。

将梯度浓度稀释的叶绿素 a 和叶绿素 b 按照上述自定义方法进行检测。每个样品重复三次。样品的标准差低于0.002 Abs。

03 实验结论

本研究证明了NanoDrop One/OneC超微量分光光度计可以使用用户自定义方法测定叶绿素a 和叶绿素b。很小的标准差表明重复测量之间有很高的重复性。验证了NanoDrop One/ OneC 超微量分光光度计定量样品的准确性和重复性。使用自定义方法测定叶绿素a 和b 是研究和科学进步的宝贵工具。

自定义方法下载

1.导航到www.thermofisher.com/nanodrop

2.在左侧选择“NanoDrop软件下载”

3.选择“NanoDrop One/OneC”选项卡

4.选择“本地控制软件下载说明”

5.滚动到“如何添加一个NanoDrop One/OneC 自定义方法文件”，然后单击“叶绿素含量方法”。 

6.解压缩自定义方法文件并将。method文件复制到USB设备，然后按照在线“从USB设备上传自定义方法到仪器的说明”进行操作。

参考文献

1. J.D. Barnes, L. Balaguer, E. Manrique, S. Elvira, and A.W. Davison (1991). A reappraisal of the use of DMSO for the extractions and determination of chlorophylls a and b in lichens and higher plants. Environmental and Experimental Botany. Vol. 32. No. 2, 85–100.

2. R.J. Porra, W.A. Thompson and P.E. Kriedemann. Determination of accurate extinction coefficients and simultaneous equations for assaying chlorophylls a and b extracted with four different solvents: verification of the concentration of chlorophyll standards by atomic absorption spectroscopy (1989). Biochimica et Biophysica Acta. 975, 384–394.

NanoDrop One/OneC，仅需1-2μL样品，5s内得出结果。内置Acclaro™智能样本检测技术，可以分析核酸中的蛋白质、苯酚、盐酸胍、胍盐等污染，自动计算并校正给出真实的核酸浓度。可选FDA  21 CFR Part11审计追踪软件，满足合规性要求。另外还支持蛋白浓度和和自定义检测等应用。

除了在NanoDrop One/OneC PC端控制软件上建立了自定义方法外，还可以从NanoDrop主页的软件部分下载定制的检测方法，现有叶绿素含量法、葡萄糖HK试剂盒（NADH）法、碳氧-血红蛋白、球形金纳米颗粒法等，可实现更广范的应用。

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