自定义法检测血红蛋白，让你见识NanoDrop的科技

NanoDrop自定义检测模式

Thermo Scientific™ NanoDrop™超微量分光光度计可使用1-2 μL的样品可靠地测量核酸和蛋白质。然而，NanoDrop™超微量分光光度计也可用于许多其他应用。本篇文章讨论了NanoDrop One/OneC超微量分光光度计如何使用自定义方法测量血红蛋白。

NanoDrop血红蛋白检测

血红蛋白检测原理

血红蛋白是一种存在于红细胞中的四聚体蛋白，可以可逆地结合氧气。NanoDrop™超微量紫外-可见光分光光度计可以利用合适的消光系数和吸光度峰值来定量各种形式的血红蛋白。

氧合血红蛋白含有结合氧，在 414 nm、541 nm 和 576 nm 处显示吸光度峰。

脱氧血红蛋白不含结合氧，在 431 nm 处显示吸光度峰。

高铁血红蛋白由于含有Fe3+而不能结合氧，在 406 nm 处显示吸光度峰。

此外，溶血会影响许多实验分析的准确性。NanoDrop™超微量分光光度计测量样品在414nm处的吸光度，可用于评估血浆或血清样品是否发生溶血。游离氧合血红蛋白的增加会导致414nm处的吸光度升高。这一特性使得NanoDrop™在检测溶血情况方面成为一种可靠的工具，为实验数据的准确性提供了重要的参考。

血红蛋白检测方法

在NanoDrop One/OneC PC端控制软件上建立创建一种自定义方法，用于测量血红蛋白在 406、414、431、541 和 576 nm（区分氧合血红蛋白、脱氧血红蛋白和高铁血红蛋白所需的五个波长）处的吸光度。也可在NanoDrop主页的软件部分下载定制的碳氧-血红蛋白检测方法。

血红蛋白检测结果

在NanoDrop One/OneC上测量高铁血红蛋白的典型吸光度光谱，峰值在406nm处。在541nm和576nm处没有氧合血红蛋白的峰。NanoDrop One/OneC可准确检测出各种形式的血红蛋白。

图1. NanoDrop One/OneC高铁血红蛋白检测界面

每种溶液5次重复的标准偏差范围为0.015-0.552A。各溶液的变异系数为0.61 ~ 2.79%。检测结果显示了NanoDrop One/OneC超微量分光光度计高度的准确性和重复性。

表1. 血红蛋白原液浓度为8mg /mL，然后进行连续稀释，形成4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL和0.125 mg/mL的标准品，每个标准品重复检测5次。血红蛋白原液由MP Biomedicals提供。

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总结一下

本应用描述的血红蛋白定制方法可用于测定氧合血红蛋白和脱氧血红蛋白浓度。根据不同的实验需要，可以使用该方法来监视414 nm吸光度测定样品是否溶血。如果测量氧合血红蛋白，该方法可用于监测541 nm和576 nm处的吸光度。如果测量高铁血红蛋白，该方法也可用于监测406 nm处的吸光度。

参考文献：

1. Peter J. Kennelly, PhD & Victor W. Rodwell, PhD, in Harper’s Illustrated Biochemistry(McGraw-Hill Companies, Inc, 29th Edition., 2012), pp. 48–55.

2. Trefor Higgins, M.Sc., John H. Eckfeldt, M.D., Ph.D., James C. Barton, M.D., Basil T. Doumas, Ph.D., in Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics(Elsevier Saunders, Fifth Edition., 2012), pp. 985–988.

3. M. B. Kirschner et al., Haemolysis during Sample Preparation Alters microRNA Content of Plasma. PLOS ONE. 6, e24145 (2011).

4. E. J. van Kampen, W. G. Zijlstra, in Advances in Clinical Chemistry, A. L. Latner, M. K. Schwartz, Eds. (Elsevier, 1983, S0065242308604011), vol. 23, pp. 199–257.

5. S. O. Sowemimo-Coker, Red blood cell hemolysis during processing. Transfus. Med. Rev. 16, 46–60 (2002).

6. J. S. Shah, P. S. Soon, D. J. Marsh, Comparison of Methodologies to Detect Low Levels of Hemolysis in Serum for Accurate Assessment of Serum microRNAs. PLOS ONE. 11, e0153200 (2016).

7. Optical Absorption of Hemoglobin, (available at http://omlc.org/spectra/hemoglobin/index.html).

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