NanoDrop内毒素检测：我的强大，你无法想象

为了更好地适应不同的实验需求，NanoDrop提供了自定义检测模式的功能。今天和大家分享的是NanoDrop自定义检测模式中内毒素的检测方法。

NanoDrop自定义检测模式

对核酸、蛋白进行浓度、纯度、污染物质控是大家最为熟知的NanoDrop常规应用，除此之外，有时需要对其他类型的生物分子进行浓度测量，为了更好地适应不同的实验需求，NanoDrop提供了自定义检测模式的功能。使用自定义检测模式，用户可以选择特定的波长范围进行测量，以适应不同的分子或实验条件。今天和大家分享的是NanoDrop自定义检测模式中内毒素的检测方法。

内毒素检测的重要性

内毒素是一种脂多糖（lipopolysaccharide，简称LPS），主要存在于革兰氏阴性菌中。内毒素污染是生物技术和药物应用中的一个常见问题，内毒素的存在已被证明会导致细胞毒性、热原免疫反应并降低转染效率。因此，对内毒素进行准确的定量尤为重要。

内毒素检测原理

鲎变形细胞裂解物 (Limulus amebocyte lysate，LAL) 检测是目前最常用的内毒素检测方法，主要试剂LAL是从鲎中提取的血细胞（变形细胞）的水提取物。当鲎变形细胞遇到革兰氏阴性菌中的脂多糖(LPS)时，凝血级联反应被激活，活化的凝血酶催化合成底物Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA释放对硝基苯胺(pNA)，释放的pNA会产生一种黄色可见光，最后使用NanoDrop超微量分光光度计测定405 nm处的吸光度并进行定量分析。

图1. 级联活化的凝血酶催化对硝基苯胺(pNA)的释放。

检测方法及结果

在NanoDrop One/OneC PC端控制软件上建立自定义方法，使用标准曲线定量可见光范围(350-850nm)内的内毒素浓度。

结果显示内毒素标准曲线线性良好，R2 达到了0.9995（图2）。基于对未知样品三次重复测量，标准差小于或等于0.011A，变异系数(%CV)范围为1.03%至2.80%(表1)。检测结果体现了NanoDrop One/OneC超微量分光光度计高度的准确性和可重复性。

NanoDrop One/OneC超微量分光光度计和相关的定制方法为定量蛋白质或核酸样品中的内毒素提供了一种简单可靠的方法。

图2. 采用NanoDrop One/OneC分光光度计在405 nm处测定吸光度。标准样本用深蓝色方块表示，未知样本用橙色方块表示。表1.未知样品的平均吸光度，标准偏差和%CV值。所用试剂盒为Thermo Scientific™ Pierce 显色内毒素定量试剂盒。

• NanoDrop One/OneC，仅需1-2μL样品，5s内得出结果。内置Acclaro™智能样本检测技术，可以分析核酸中的蛋白质、苯酚、盐酸胍、胍盐等污染，自动计算并校正给出真实的核酸浓度。可选FDA  21 CFR Part11审计追踪软件，满足合规性要求。另外还支持蛋白浓度和和自定义检测等应用。

• 除了在NanoDrop One/OneC PC端控制软件上建立了自定义方法外，还可以从NanoDrop主页的软件部分下载定制的检测方法，现有叶绿素含量法、葡萄糖HK试剂盒（NADH）法、碳氧-血红蛋白、球形金纳米颗粒法等，可实现更广范的应用。

NanoDrop One/OneC

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