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【字体: 大 中 小 】 时间:2024年09月10日 来源:基因有限公司
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LI-COR Odyssey CLx是一款高通量、双重荧光扫描仪,特别适用于ICW和Western Blot实验。它通过使用近红外荧光标记,提供更高的灵敏度和更低的背景噪声,从而提高了数据的准确性和通量。
简介
今天分享一篇发表在JACS上的文章,题目为“Discovery of a Potent and Selective Targeted NSD2 Degrader for the Reduction of H3K36me2”。在本文中,作者开发了一种新的NSD2靶向降解物UNC8153,可以有效和选择性地降低NSD2蛋白和H3K36me2染色质标记的细胞水平,从而在一定程度上实现多发性骨髓瘤细胞病理表型的下调。
部分结果展示
01 NSD2靶向降解剂的设计与评价
作者根据已知的NSD2拮抗剂UNC6934和NSD2结构特性合成设计了一系列选择性的NSD2靶向降解物。结果显示含有精氨酸的化合物在24小时内至少部分降低了NSD2的水平,其中六碳Linker的UNC7753是NSD2最有效的降解剂,其最大观察降解值(Dmax)为81%,半最大降解浓度(DC50)为1.20±0.3μM。传统的Western Blot也进一步确认UNC7753能够以剂量依赖的方式降解NSD2的两种亚型。
文中使用LI-COR Odyssey CLx及细胞内蛋白质免疫印迹(ICW)技术检测多种合成化学物的最大降解值 (Dmax)和半数最大降解浓度(DC50)及NSD2的表达水平,以及传统Western Blot定量NSD2的蛋白表达情况。极大的提高了数据的准确性。
02 UNC7753转化为UNC8153通过UBR非依赖性机制促进NSD2降解
完全缺乏氨基酸部分的UNC8153的DC50为0.35μM,Dmax为79%,是UNC7753的三倍多。表明结果并不如之前预期的那样NSD2的降解需要一个N-末端α-氨基来识别UBR-box结构域并由UBR E3泛素连接酶介导。随后发现用UNC7753处理 U2OS 细胞,并通过质谱法发现细胞裂解物中存在高浓度的UNC8153。结果表明类似含有氨基酸的UNC7753可能是NSD2降解物一种前体药物。
03 UNC8153降低多种细胞系中的H3K36me2水平。
作者将UNC8587作为阴性对照化合物,并在 KMS11 细胞(图BC)、 MM1S 细胞(图E)、RS411 细胞(图F)和U2OS 细胞(图G)中检测了UNC8587对NSD2 降解和 H3K36me2 水平的影响。
总结
文中多次使用LI-COR Odyssey CLx进行检测细胞内蛋白质免疫印迹(ICW)和Western Blot实验。LI-COR Odyssey CLx是一款高通量、双重荧光扫描仪,特别适用于ICW和Western Blot实验。它通过使用近红外荧光标记,提供更高的灵敏度和更低的背景噪声,从而提高了数据的准确性和通量。它的优势包括同时检测多个标记、定量分析的精确度以及快速的数据采集,显著提高了实验效率和数据可靠性。
Odyssey®的丰富应用
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