FUSEP 策略解锁活细胞中 E2 特异性泛素结合谱：开启疾病治疗新征程

为探究细胞内 E2 特异性泛素（Ub）结合谱，研究人员开发 FUSEP 策略。研究发现多种 E2 酶参与非赖氨酸泛素化，还鉴定出酪氨酸泛素化修饰等。该成果有助于揭示 E2 特异性 Ub 结合谱，为潜在治疗应用提供方向。

　　泛素（Ub）结合酶 E2 主要决定泛素结合形式，如泛素异肽（赖氨酸）、泛素氧酯（丝氨酸 / 苏氨酸）或泛素硫酯（半胱氨酸）。然而，细胞内 E2 特异性的泛素结合谱仍不明确。在此，研究人员开发了融合 E2-Ub-R74G 分析（FUSEP）策略，以氨基酸分辨率解析细胞内 E2 特异性泛素结合谱。探针特异性的亮氨酸 - 甘氨酸 - 甘氨酸 - 甘氨酸修饰的泛素残基，能够系统研究非赖氨酸泛素结合，并提供位点特异性信息。研究发现多种 E2 酶参与非赖氨酸泛素化。使用 UBE2D3-Ub-R74G 探针进行分析，鉴定出人类 Cullin-1（Cullin-RING E3 泛素连接酶的支架蛋白）上的一种翻译后修饰 —— 酪氨酸泛素化，这种修饰与赖氨酸泛素化不同。还鉴定出一种单次跨膜 E3 连接酶 RNF149，它与 UBE2D3 协同作用，通过泛素化凋亡相关斑点样蛋白 ASC 来调节细胞焦亡。这一工具的出现，为揭示 E2 特异性泛素结合谱、识别未知的 E3 泛素连接酶，进而用于潜在治疗应用开辟了道路。