唾液酸适配体和 RNA 原位杂交介导的邻近连接分析法用于单细胞中糖基化 RNA(glycoRNAs)的空间成像研究:开拓糖基化 RNA 研究新视野
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时间:2025年01月23日
来源:Nature Protocols 13.1
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糖基化 RNA(glycoRNAs)在细胞过程和疾病中意义重大,但缺乏有效研究工具,尤其是成像技术。研究人员开发了唾液酸适配体和 RNA 原位杂交介导的邻近连接分析法(ARPLA)。该技术能高灵敏、特异地可视化含唾液酸的 glycoRNAs,有助于探索其在细胞中的作用。
糖基化 RNA(glycoRNAs)作为一类新兴分子,在细胞进程和疾病中发挥着潜在作用,备受关注。然而,由于缺乏有效的研究工具,尤其是用于研究 glycoRNAs 空间分布的成像技术,对其展开研究颇具挑战。近期,一项名为唾液酸适配体和 RNA 原位杂交介导的邻近连接分析法(ARPLA)的 glycoRNAs 成像技术应运而生,它能够高灵敏度且高特异性地可视化含有唾液酸的 glycoRNAs。在此,将详细介绍 ARPLA 辅助 glycoRNAs 成像在多种细胞类型中的实验设计原理和分步操作流程。该流程涵盖了靶点选择、寡核苷酸设计与制备、RNA 原位杂交优化步骤、聚糖识别、邻近连接、滚环扩增,以及图像采集和分析指南。在设计好探针组并准备好细胞的情况下,具备生物化学和荧光显微镜专业知识的人员通常能在 1 天内完成基于 ARPLA 的 glycoRNAs 成像。ARPLA 方法使研究人员能够探究 glycoRNAs 在各种细胞进程中的空间分布、运输过程以及功能贡献。
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