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合成长肽（SLPs）是一种有前景的疫苗形式，但设计有效 SLP 疫苗面临难题。研究人员开展针对 HBV 的 SLP 疫苗研究，分析树突状细胞（DC）免疫肽组。结果发现不同佐剂对 SLP 交叉呈递无显著影响，还鉴定出多种 HBV SLP 衍生肽。该研究为疫苗设计提供新视角。
在生命科学和健康医学领域，疫苗研发一直是备受瞩目的焦点。尤其是合成长肽（SLPs）作为一种新兴的疫苗形式，被寄予厚望。它有望利用树突状细胞（DC）来治疗慢性感染或癌症。然而，当前 SLPs 疫苗的设计面临诸多挑战。一方面，确定哪些 SLPs 能在 DC 的人类白细胞抗原 I 类分子（HLA-I）上有效交叉呈递，主要依赖计算机预测和多因素 T 细胞检测，这些方法不仅复杂，而且不够精准。另一方面，Toll 样受体（TLR）配体作为佐剂，虽能诱导 DC 成熟以优化 T 细胞启动，但它们对 DC 交叉呈递的具体影响尚不明确。对于慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染这种全球范围内影响数百万人的疾病，研发有效的治疗性疫苗迫在眉睫。在此背景下，来自鹿特丹伊拉斯姆斯大学医学中心（Erasmus MC University Medical Center Rotterdam）的研究人员开展了深入研究，相关成果发表在《npj Vaccines》上。
为了探究这些问题，研究人员进行了一系列实验。他们利用敏感的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术，对来自 6 名 HLA-A02:01/HLA-A11:01 匹配的健康供体的 DC 进行研究。这些 DC 被加载了由 12 种基于 HBV 的 SLPs 与 TLR1/2 配体（Amplivant?）或 TLR3 配体（PolyI:C）组合的原型 HBV 疫苗。
在 DC 抗原呈递方面，研究人员发现，不同佐剂对 DC 抗原呈递在数量上没有显著差异，且 DC 肽库主要由 B 等位基因呈递。他们通过将 12 种 HBV 来源的 SLPs 加载到来自不同健康供体的单核细胞衍生的 DC（moDCs）上，并分别用 TLR1/2 配体或 TLR3 配体刺激，然后对 HLA-I - 肽复合物进行免疫沉淀和 LC-MS/MS 分析，从而得出这一结论。
对于 DC 免疫肽组反映的细胞过程，研究发现，虽然 55% 的鉴定肽在不同佐剂处理的 DC 中共享且峰强度相似，但 TLR3 刺激产生了更多佐剂特异性肽。通过对佐剂特异性源蛋白的分析，发现 TLR3 特异性源蛋白的相互作用网络更显著，且与 “病毒应答” 的生物学过程相关，这表明 DC 免疫肽组能反映细胞内正在进行的生物学过程。
在交叉呈递的 SLP 肽的鉴定上，研究人员利用 DDA 技术，从 10 种 SLPs 中总共鉴定出 33 种独特的 SLP 衍生的 HLA 肽，其中 26 种在多个样本中可重复鉴定，还发现了 14 种新的 HBV 衍生的 HLA 肽。此外，DIA 技术进一步补充了数据集，鉴定出了新的肽序列。
关于 HLA 对 SLPs 的呈递预测，研究表明，SLPs 的 HLA 呈递不能完全通过计算机预测。虽然预测的 HLA 结合肽含量与 MS 肽回收之间存在显著相关性，但不同 SLPs 的情况有所差异，这凸显了对 SLP 加载的 DC 进行 MS 分析的重要性。
研究结论表明，该研究全面分析了 SLP 加载的 HLA 匹配的 DC 的 HLA-I 配体组，鉴定出多种 HBV SLP 衍生的 HLA 肽，包括已知和新的潜在 T 细胞表位。虽然不同佐剂对 SLP 交叉呈递没有显著影响，但研究揭示了 DC 免疫肽组学在研究 DC 抗原呈递调控和治疗性疫苗设计方面的重要价值。
研究讨论部分指出，选择不同的佐剂会影响疫苗诱导的免疫反应。虽然在体外研究中未发现不同佐剂对 SLP 交叉呈递的显著差异，但体内情况可能不同，未来可能需要将佐剂与 SLPs 结合或共封装。此外，研究还发现 HLA - B 等位基因在 DC 抗原（交叉）呈递中占主导地位，这为疫苗设计提供了新的方向。同时，研究也评估了计算机预测交叉呈递的性能，发现其存在一定局限性，因为 DC 具有更复杂的抗原加工机制。
总的来说，该研究为抗原基疗法的发展带来了新的见解，DC 免疫肽组学有望成为加速、指导、改进和个性化疫苗设计的有力工具。
研究人员在实验过程中用到的主要关键技术方法包括：首先，通过 Ficoll - Paque 密度梯度离心从健康供体的血沉棕黄层中分离外周血单个核细胞（PBMCs），并进一步获取单核细胞衍生的 DC（moDCs）和初级 DC。然后，利用免疫沉淀技术富集 HLA-I - 肽复合物，具体是使用抗泛 HLA-I 抗体 W6/32 与蛋白 A 琼脂糖珠结合制备亲和珠进行免疫沉淀。最后，运用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术对提取的 HLA 肽进行分析，包括数据依赖采集（DDA）和数据独立采集（DIA），并通过特定软件和算法对数据进行处理和分析 。
