还有什么是NanoDrop不能测的——简单快速检测纳米颗粒浓度

聚乳酸-羟基乙酸（poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA）是用于制备聚合物纳米颗粒（NPs）的热门聚合物，因其具备生物相容性、可降解性等多种优良特性，在药物递送系统中极具潜力。

准确测定其摩尔/颗粒浓度对发挥 PLGA 聚合物纳米颗粒在生物医学应用中的优势至关重要。然而，传统方法测量聚合物纳米颗粒浓度耗时费力，如电子显微镜，纳米颗粒跟踪分析（NTA）和可调电阻脉冲传感（TRPS）等。

NanoDrop One 微量紫外-可见分光光度计可用于测定高浓度金纳米颗粒的表面等离子体共振现象。本篇文章探讨了利用 OD600（600 nm 波长光散射）法测定 PLGA 纳米颗粒浓度的潜力，并与纳米颗粒追踪分析（NTA）测量结果进行了对比。

纳米颗粒合成

采用单乳液水包油法合成马来酰亚胺聚乙二醇聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA-PEG-MAL）。

1、将 PLGA-PEG-MAL（20kDa 50:50 PLGA，5kDa PEG，来源于 Nanosoft Polymers）以 5mg/mL 的浓度溶解于二氯甲烷（DCM）中。

2、取 500µL 的 PLGA-PEG-MAL/DCM 溶液加入到含有 2mL 0.1% 聚乙烯醇（PVA）的闪烁瓶中，冰浴超声处理。

3、室温搅拌使二氯甲烷挥发，离心提纯纳米颗粒，再用超纯水洗涤并稀释成不同浓度样品（10mg/mL-1mg/mL）。

纳米颗粒测量

纳米颗粒跟踪分析（NTA）：将 PLGA-PEG-MAL 聚合物纳米颗粒样品稀释于1mL 超纯水中，每帧的颗粒计数在20到100个之间。调整相机参数确保粒子成像质量，注射泵以50-60A.U的输注速率注射样本，取三段 30 秒视频计算 NP 计数并调检测阈值。

NanoDrop One 分光光度计 OD600 测量：取 2μL 样品滴于分光光度计样品台，测 600nm 处光密度三次，每次测量间用无绒擦拭纸清洁样品台。

研究结果

图1. 纳米粒子浓度（mg/ml）与(A) NTA测定的粒子数和(B) NanoDrop One分光光度计测定的纳米粒子OD600吸光度关系图。

结果显示两种测量方法在较宽的浓度范围内（1 mg/mL至10 mg/mL）均具有很强的线性关系，NanoDrop One的R2值为0.9993，这与NTA测量结果一致。

NanoDrop One 的 OD600 测量精准、可重复，无需样品稀释，仅用 2μL 样品。

结果表明，NanoDrop One可以作为通过 OD600 测量聚合物纳米颗粒浓度的传统方法的简单替代方法。

OD600基于光散射，散射光的强度与悬浮液中纳米颗粒的浓度成正比，但不同粒径聚合物纳米颗粒斜率有别，需校准曲线确定 OD600 对应聚合物纳米颗粒数量。研究表明，OD600 测量的聚合物纳米颗粒浓度，与 NTA 可比。

NanoDrop One 分光光度计用 OD600 测 PLGA 聚合物纳米颗粒浓度简便快速，可测高浓度微体积样品，经济实用，有助于 PLGA 聚合物纳米颗粒质量控制与下游应用。

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