一种用于检测香蕉植株中黄瓜花叶病毒的快速逆转录-重组酶聚合酶扩增-侧向流动试纸条检测方法

《Applied Fruit Science》：A Rapid Reverse Transcription–Recombinase Polymerase Amplification–Lateral Flow Dipstick Assay for the Detection of Cucumber Mosaic Virus in Banana Plants

黄瓜花叶病毒（CMV）检测技术开发：建立RT-RPA-LFD快速诊断方法，显著提升灵敏度（0.18pg）和特异性，适用于资源有限地区的现场检测，并成功验证于香蕉等作物。

　　

摘要

黄瓜花叶病毒（CMV）属于Cucumovirus属，具有广泛的宿主范围和多样的毒株变体，是分布最广的植物病毒之一，对全球农业构成了严重威胁，导致农作物产量大幅下降。管理植物病毒的唯一有效方法是使用无病毒的种植材料并控制传播媒介。及早准确地识别致病因子是有效控制病毒性疾病的关键步骤，因此快速、简便且灵敏的诊断方法至关重要。然而，传统的检测方法（如酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）不仅耗时、成本高昂、需要大量人力，而且通常依赖专门的实验室设施，这限制了它们在资源有限环境中的应用。为了解决这些问题，研究人员开发了一种快速、用户友好的逆转录-重组酶聚合酶扩增-侧向流动试纸条（RT-RPA-LFD）诊断方法用于检测CMV。在该方法中，通过RNA、cDNA以及从受感染香蕉叶片中提取的粗提液等不同模板成功扩增了CMV的衣壳蛋白（CP）基因。实验表明：使用香蕉叶片样本提取的RNA时，检测灵敏度可达约0.18 pg；使用cDNA时灵敏度为约18 fg；使用粗提液时检测限为10^-5（1.8 pg），并且可在侧向流动试纸上产生清晰的视觉信号。该检测方法对CMV具有高度特异性，未观察到与其他感染香蕉植物的相关植物病毒的交叉反应。RT-RPA-LFD方法的简便性和高效性为即时疾病检测带来了重大进展，不仅适用于香蕉等作物以选择健康的母株，也适用于其他易受CMV感染的作物。