VEXAS综合征诊断与监测新策略：Sanger测序、NGS与SWIM评分的系统评估

本期推荐一项关于VEXAS综合征诊断与监测策略的重要研究。针对VEXAS缺乏标准化诊断标准的问题，研究团队通过对比Sanger测序与NGS检测UBA1变异效能，验证VAF定量准确性，并开发新型SWIM评分系统。研究发现Sanger测序可可靠检测变异并定量VAF（0.1-0.9），VAFBlood、VAFMyeloid和VEXAS细胞浓度与炎症指标CRP正相关，而SWIM评分（皮肤受累、体重减轻、炎症、大细胞贫血）在验证队列中实现100%敏感性和65%特异性，显著优于现有Maeda评分。该研究为VEXAS的精准诊断和动态监测提供了实用工具。

在成人自身炎症性疾病领域，VEXAS综合征（空泡，E1酶，X连锁，自身炎症，体细胞）近年来备受关注。这种由UBA1基因体细胞突变引发的疾病，表现为发热、中性粒细胞性皮病、软骨炎等多系统炎症，同时伴有骨髓增生异常样血液学异常。尽管自2020年首次报道以来，医学界对其认识不断深入，但诊断标准缺乏统一规范，遗传检测指征不明确，成为临床实践中的突出难题。

目前VEXAS综合征的诊断主要依赖UBA1基因变异检测，但选择何种检测技术更为可靠？如何从众多疑似患者中筛选出最需要检测的个体？变异等位基因频率（VAF）能否用于疾病监测？这些问题的解答对提高诊断效率和患者管理质量至关重要。为此，丹麦奥胡斯大学医院的研究团队在《Journal of Clinical Immunology》上发表了一项系统研究，全面评估了VEXAS综合征的诊断和监测策略。

研究采用了多项关键技术方法：通过Sanger测序和扩增子NGS对疑似VEXAS患者进行UBA1变异检测；利用稀释实验比较两种技术的VAF定量准确性；基于临床数据回顾性分析开发SWIM评分系统；通过连续样本监测VAF_Blood、VAF_Myeloid和VEXAS细胞浓度动态变化；使用ROC曲线分析评估评分系统性能。研究包含104人的主要队列和64人的验证队列，样本来自奥胡斯大学医院临床免疫学、血液学和风湿科转诊患者。

Sanger测序与NGS检测UBA1变异的比较

在主要队列中，Sanger测序检出12例UBA1变异（12%），其中11例初检明确，1例经重复采样确认。所有变异均为单核苷酸变异。NGS检测证实了所有Sanger发现的变异，但未发现新的真阳性病例，仅检测到一些可能由甲醛固定引起的人工假象变异。这一结果表明，在疑似VEXAS患者中，NGS相比Sanger测序并未提高诊断产出。

VAF定量准确性的评估

通过稀释实验发现，NGS的VAF定量与预期值高度一致（R²=1.0）。Sanger测序使用反向引物数据时准确性较高（斜率0.98，R²=1.0），而正向引物在低VAF样本（<0.1）存在高估现象。在患者样本分析中，经过人工假象校正的双引物平均VAF与NGS结果高度相关（R²=0.86）。重复性实验显示Sanger测序的VAF定量变异系数为10%。研究表明Sanger测序可准确测定0.1-0.9范围内的VAF。

连续样本中VAF动态变化

对3例患者的多时间点监测显示，VAF_Blood和VAF_Myeloid随时间呈上升趋势。阿扎胞苷治疗与VAF_Myeloid的持续下降相关，而VAF_Blood的变化模式不太一致。VAF_Myeloid比VAF_Blood波动更小，可能提供更稳定的等位基因负荷指标。VEXAS细胞浓度（VAF_Blood×白细胞浓度）在阿扎胞苷治疗期间显著下降（患者1下降76%，患者2下降79%），并与临床症状改善同步。

VAF与炎症指标的相关性

在13例VEXAS患者中，VAF_Blood、VAF_Myeloid和VEXAS细胞浓度均与CRP水平呈正相关，表明这些参数与疾病炎症程度相关。

患者特征与检测结果的关联分析

UBA1变异阳性患者更常出现非感染性发热、非意愿体重减轻、皮肤受累（特别是白细胞碎裂性血管炎）、软骨炎和眶周水肿。血液学检查显示更高的红细胞沉降率、平均红细胞体积，以及更低的血红蛋白和单核细胞水平。变异阳性患者接受更高剂量的糖皮质激素治疗和更多的红细胞输注。

VEXAS评分系统的测试

Maeda评分在主要队列中的AUC为0.83，最佳截断值（Youden指数）为4分，灵敏度82%，特异性73%。为达到100%灵敏度需要降至2分，但特异性仅为29%。新开发的SWIM评分（皮肤受累、体重减轻、炎症、大细胞贫血各1分）表现更优，AUC为0.89。2分截断时实现100%灵敏度，特异性达47%，在验证队列中特异性进一步提高至65%，显著优于Maeda评分。

研究结论表明，Sanger测序是检测UBA1变异和定量VAF的可靠方法，特别适用于VAF在0.1-0.9范围的情况。VAF_Blood、VAF_Myeloid和VEXAS细胞浓度与炎症程度相关，有潜力作为疾病监测的标志物。新开发的SWIM评分系统相比现有的Maeda评分具有更好的性能，能更有效地筛选需要遗传检测的疑似患者。

讨论部分强调，本研究首次系统比较了Sanger测序和NGS在VEXAS诊断中的表现，证实了Sanger测序的可靠性，这对资源有限 settings 特别有意义。提出的VAF_Myeloid和VEXAS细胞浓度是新颖的监测指标，需要进一步验证。SWIM评分简化了临床筛选流程，提高了检测效率。研究的局限性包括单中心设计、样本量有限以及回顾性数据收集可能低估某些临床特征。未来研究应在前瞻性多中心队列中验证这些发现，并探索VEXAS细胞浓度在治疗监测中的价值。

这项研究为VEXAS综合征的诊断和监测提供了实用工具，有望改善患者管理并减少不必要的检测。Sanger测序的验证使其在更广泛医疗机构中应用成为可能，而SWIM评分为临床医生提供了有效的患者筛选工具，最终促进VEXAS综合征的早期诊断和及时干预。