中国慢性肉芽肿病患者CYBB基因突变谱解析：IFN-γ治疗应答预测新策略

本研究聚焦慢性肉芽肿病（CGD）这一原发性免疫缺陷病，针对中国人群中CYBB基因突变导致NADPH氧化酶功能缺陷的机制展开深入探索。研究人员通过对5个无亲缘关系中国家庭的6例患者进行基因测序与功能验证，发现包括c.1507A>G(p.T503A)和c.1587_1605del(p.529_535del)在内的两种新突变，并首次证实 synonymous突变c.252G>T(p.A84A)实际引起外显子跳跃。更重要的是，研究通过中性粒细胞呼吸爆发实验证明IFN-γ仅能挽救p.I15V突变者的功能缺陷，为临床精准预测IFN-γ疗效提供了关键实验依据。

　　

在免疫学的神秘世界里，有一类被称为"慢性肉芽肿病（Chronic Granulomatous Disease, CGD）"的罕见疾病，患者由于先天免疫系统缺陷，无法有效清除入侵的细菌和真菌，导致反复发生严重感染。这种疾病的根源在于NADPH氧化酶复合体的功能失常——这是免疫细胞对抗病原体的重要"武器系统"，能够产生活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）来杀灭微生物。

在中国，CGD的发病率估计仅为百万分之三，远低于欧美国家，但实际数字可能被低估。更令人担忧的是，约65%的CGD病例由X染色体上的CYBB基因突变引起，该基因编码的gp91^phox蛋白（又称NOX2）是NADPH氧化酶的核心组分。当这个基因发生突变时，中性粒细胞和巨噬细胞就无法产生足够的ROS，导致患者从幼年时期就开始遭受反复的细菌感染，尤其是非结核分枝杆菌（NTM）和结核分枝杆菌（TB）感染，严重时甚至危及生命。

尽管干扰素-γ（IFN-γ）已被尝试用于CGD治疗，但其疗效存在显著个体差异，背后的机制尚不明确。为了解决这一临床难题，来自复旦大学附属上海市公共卫生临床中心的研究团队在《Journal of Clinical Immunology》上发表了最新研究成果，通过对中国CGD患者的CYBB基因突变进行系统分析，不仅发现了新的致病突变，更重要的是建立了预测IFN-γ治疗应答的实验方法。

研究人员采用了多中心合作的研究策略，收集了来自5个无亲缘关系家庭的6例CGD患者样本。通过全外显子测序（Whole Exome Sequencing, WES）技术筛查致病突变，并经Sanger测序验证；利用RT-PCR和凝胶电泳分析突变对CYBB转录本的影响；通过Seahorse细胞能量代谢分析仪检测中性粒细胞呼吸爆发功能（以氧消耗率OCR为指标）；采用流式细胞术检测细胞表面gp91^phox表达和ROS产生能力。

临床特征与基因突变鉴定

研究共纳入6例来自5个中国家庭的CGD患者，临床表现均包括反复肺部感染和分枝杆菌感染。基因分析发现5种CYBB基因突变：c.125C>A(p.T42K)、c.43A>G(p.I15V)、c.252G>T(p.A84A)、c.1587_1605del(p.530_535del)和c.1507A>G(p.T503A)。其中后两种为首次报道的新突变，前三种虽曾有报道但缺乏功能验证。特别值得注意的是，c.252G>T突变在女性杂合子患者（P4）中也表现出疾病症状，打破了X连锁遗传仅影响男性的传统认知。

突变对CYBB表达的影响

研究人员通过RT-PCR分析发现，不同突变对CYBB表达的影响程度各异：p.I15V突变使转录水平降低32-42%；p.530_535del突变导致转录本显著减少；而看似同义的c.252G>T突变实际上引起了外显子3的完全跳跃，生成缺失48-84位氨基酸的截短蛋白。流式细胞术证实携带该突变的女性患者（P4）仅有约40%的细胞表达正常CYBB蛋白，符合X染色体随机失活规律。

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呼吸爆发缺陷与IFN-γ应答差异

通过Seahorse分析仪检测中性粒细胞呼吸爆发功能，发现所有患者细胞在PMA（佛波酯）刺激下均表现出明显的氧消耗缺陷。然而，IFN-γ预处理仅能显著改善p.I15V突变中性粒细胞的功能，使其OCR恢复至接近正常水平。其他突变（包括p.A84A剪接突变、p.530_535del缺失和p.T503A突变）均对IFN-γ无应答。这一发现具有直接临床意义：携带p.I15V突变的患者（P2）在接受IFN-γ联合抗菌治疗后两周，临床症状明显改善，影像学显示炎症浸润得到控制。

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讨论与意义

本研究不仅扩充了中国人群CGD的CYBB突变谱，更重要的是揭示了突变类型与IFN-γ治疗应答之间的内在联系。研究发现，即使是相同的c.252G>T突变，在不同个体中也可能导致不同的临床表现，提示除中性粒细胞功能外，整体免疫状态和其他免疫细胞亚群也可能影响疾病进程。

从

从机制角度看，IFN-γ可能通过多种途径增强NADPH氧化酶功能：上调CYBB基因转录、通过NAMPT介导的NAD⁺补救途径增强单细胞氧消耗、促进一氧化氮（NO）产生等。对于保留部分NADPH氧化酶功能的患者（如p.I15V），IFN-γ可能通过ROS和NO双途径发挥作用；而对于完全缺失酶活性的患者，NO可能成为主要效应分子。

研究的临床意义在于建立了体外评估IFN-γ疗效的预测方法：通过检测患者中性粒细胞在IFN-γ预处理后呼吸爆发功能的改善程度，可以预测该患者对IFN-γ治疗的潜在应答情况。这一方法对于指导CGD治疗策略选择具有重要意义，特别是对于无法进行造血干细胞移植（HSCT）或需要长期抗菌治疗的患者。

该研究为CGD的精准治疗提供了新思路，强调在基因诊断基础上，应结合功能评估来制定个体化治疗方案，最终改善这一罕见病患者的临床预后。