人血清中对乙酰氨基酚和卡米洛芬LC-MS/MS定量分析方法的开发与验证及其在药代动力学研究中的应用

本刊推荐：研究人员针对固定剂量复方制剂中对乙酰氨基酚(paracetamol)和卡米洛芬(camylofin)同步生物分析难题，开发了一种基于蛋白沉淀前处理技术的LC-MS/MS定量方法。该方法在0.1%甲酸-甲醇(50:50)流动相体系下，6分钟内完成分离分析，验证结果显示线性范围分别达100-20,000 ng/mL和0.25-200 ng/mL，成功应用于12名健康印度受试者空腹/餐后状态药代动力学研究，为临床监测提供关键技术支撑。

　　

在疼痛治疗领域，对乙酰氨基酚(paracetamol)与卡米洛芬(camylofin)组成的固定剂量复方制剂(FDC)因其协同作用被广泛应用于胃肠道绞痛、痛经等痉挛性疼痛疾病。然而，这两种药物在理化性质上存在显著差异——对乙酰氨基酚具有良好紫外吸收特性，而卡米洛芬缺乏强发色团，导致传统HPLC-UV方法难以实现同步精准定量。更关键的是，目前尚无卡米洛芬的生物分析方法报道，这严重制约了其临床药代动力学研究进展。

为解决这一技术瓶颈，Kulkarni和Mohanraj在《Future Journal of Pharmaceutical Sciences》发表了创新性研究成果。他们成功开发并验证了一种同步定量人血清中对乙酰氨基酚和卡米洛芬的LC-MS/MS方法，该方法仅需200μL血清样本，通过蛋白沉淀前处理技术，在6分钟内完成分析，为临床监测和药代动力学研究提供了高效解决方案。

研究采用Agilent 1260 Infinity II液相系统与Sciex QTRAP 5500质谱仪联用平台，以 diphenylamine 为内标，在正离子模式下通过多反应监测(MRM)模式实现精准定量。色谱分离使用Agilent Zorbax SB C₁₈柱(50 mm×2.1 mm,5μm)，以0.1%甲酸-甲醇(50:50)为流动相，流速0.5 mL/min。样本来自12名健康印度志愿者静脉采血获得的血清样本，经ACN-甲醇(9:1)含0.1%甲酸的沉淀剂处理后进样分析。

方法学验证结果全面符合US-FDA指导原则要求：选择性试验表明空白血清无基质干扰；对乙酰氨基酚和卡米洛芬的线性范围分别为100-20,000 ng/mL和0.25-200 ng/mL，相关系数R>0.99；准确度85-115%范围内，精密度CV≤15%；稳定性试验证明样本在室温、冷藏和冻融条件下均保持稳定。

质谱条件优化方面，研究人员通过流动注射分析(FIA)技术优化了离子源参数：离子化电压5500 V，源温度500°C，气帘气50 psi，雾化气35 psi，干燥气50 psi。对乙酰氨基酚的定量离子对为m/z 152→110，卡米洛芬为m/z 329→135，内标 diphenylamine 为m/z 170→152。

基质选择试验发现血清相比血浆具有更高回收率（对乙酰氨基酚89.86±3.52%，卡米洛芬95.59±2.55%）和更少色素干扰，最终确定血清为最佳分析基质。

方法学应用阶段，研究人员分析了12名健康受试者在空腹与餐后状态下服用325 mg对乙酰氨基酚+50 mg卡米洛芬FDC后的药代动力学数据。结果显示：对乙酰氨基酚在空腹状态的C_max(3123 ng/mL)显著高于餐后状态(2280 ng/mL)，T_max从0.75小时延长至2小时；而卡米洛芬的C_max在两种状态下无显著差异(空腹1.73 ng/mL vs 餐后1.53 ng/mL)，T_max均为0.75小时。

统计分析采用配对t检验证实：对乙酰氨基酚在空腹与餐后状态的血清浓度存在显著差异(p=0.0134)，而卡米洛芬无显著差异(p=0.9485)。这表明食物效应显著影响对乙酰氨基酚的吸收速率和程度，但对卡米洛芬药代动力学行为影响有限。

该研究的创新价值在于首次建立了卡米洛芬的生物分析方法，解决了因其缺乏发色团而难以检测的技术难题。所开发的LC-MS/MS方法具有灵敏度高（卡米洛芬LLOQ达0.25 ng/mL）、分析速度快（6分钟/样本）、样本需求量少（200μL血清）等优势，完全符合US-FDA生物分析方法验证指导原则。

这项研究成果不仅为对乙酰氨基酚-卡米洛芬复方制剂的临床监测提供了可靠分析方法，更深远的意义在于建立了痉挛性疼痛治疗药物的精准监测平台，为优化给药方案、评估生物等效性以及个体化用药提供了关键技术支撑，最终促进该重要复方制剂的安全有效临床应用。