25-羟基维生素D3与马立克疫苗联合胚胎注射对肉鸡孵化率、生产性能及骨骼健康的协同效应研究

本研究发现，在孵化第19天联合注射马立克疫苗（MDV）与1.25μg 25-羟基维生素D3（25(OH)D3）可显著提升肉鸡早期胫骨强度、降低胫骨软骨发育不良（TD）发生率，且不影响孵化率与35日龄生产性能，为维生素D3在畜禽骨骼健康领域的应用提供了重要实践依据。

　　

摘要

本研究评估了在科宝500肉鸡孵化第19天（ED19）向羊水中注射马立克病疫苗（MDV）单独或联合1.25μg 25-羟基胆钙化醇（25(OH)D₃）对孵化率、雏鸡质量、生产性能及骨骼质量的影响。结果显示，联合注射处理对孵化率及雏鸡一般质量无显著影响，但接受MDV+25(OH)D₃的雄性雏鸡在出栏时体长显著优于仅注射MDV的对照组。至35日龄时，肉鸡生产性能、步态评分及腿骨畸形（外翻/内翻）均无组间差异。尽管7日龄时联合处理组雏鸡的胫骨软骨发育不良（Tibial Dyschondroplasia, TD）宏观评分较低，但随着日龄增长该差异未持续显现。胫骨重量、厚度及长度在各时间点均无显著差异，但联合处理组在1日龄和7日龄表现出更高的胫骨强度。研究表明，25(OH)D₃与MDV联合注射虽不影响孵化率及整体生产性能，但可增强肉鸡早期骨骼强度与生长表现。

引言

骨骼质量是肉鸡生产中影响家禽健康与经济收益的关键因素。现代肉鸡因遗传选育导致的快速生长与体重增加，使其面临更高的骨骼异常风险，如胫骨软骨发育不良（TD）与腿骨畸形，这些不仅影响动物福利，还导致死亡率上升、肉质下降及经济损耗。维生素D₃及其代谢产物——25-羟基维生素D₃（25(OH)D₃）和1,25-二羟基维生素D₃——在禽类骨骼形成与矿化中起重要作用，但其通过胚胎注射（in ovo）施用对孵化率、雏鸡质量及后期生产性能的影响尚存争议。

以往研究显示，25(OH)D₃可促进胚胎骨骼发育、提高孵化率、改善雏鸡质量、增强骨骼形成与矿化，并提升肉鸡早期生产性能及免疫应答，但组织学评价特别是TD相关研究仍较缺乏。结合实际生产需求，将营养性物质与孵化场常规疫苗（如马立克疫苗）联合注射，是提高操作可行性的重要策略。本研究旨在探讨ED19时联合注射MDV与1.25μg 25(OH)D₃对科宝500肉鸡孵化结果、雏鸡质量、35日龄性能及骨骼质量的影响。

材料与方法

伦理声明

本研究经戈亚斯联邦大学动物实验伦理委员会批准（协议编号：014/12），实验在巴西戈亚尼亚市的实验农场进行。

实验设计与管理

从45周龄科宝500肉种鸡群中取5,160枚蛋，经48小时贮存（20°C，65%相对湿度）及5小时预热后，置于单阶段孵化器（37.5°C，58% RH）中孵化至ED19。活胚蛋（n=2,752）随机分两组：对照组注射0.05ml商业MDV疫苗；处理组注射等量疫苗添加1.25μg 25(OH)D₃（Rovimix Hy-D）。注射通过自动化Inovoject系统完成，25(OH)D₃溶液按Gonzales等（2013）方法配制。注射后蛋移入出雏器（36.5°C，65% RH），未设置无注射对照组，因本研究重点为评估25(OH)D₃与疫苗联合施用的效果。

孵化率、出雏窗口及残留分析

每4小时记录480–516孵化小时内出雏数，计算孵化率、出雏窗口时间，并对未孵化蛋进行残骸分析（包括未啄壳蛋、啄壳活胚、啄壳死胚及污染蛋）。记录不合格雏鸡数量（如趴卧腿、脐部未愈合、畸形）。

雏鸡物理质量

随机选取每篮10雄10雌雏鸡，测定出栏体重、体长及总体质量评分（采用Tona等2003标准）。

肉鸡生产性能

选取840只1日龄雄雏（每组420只），饲养于24个地面栏（每栏35只，5.25m2），自由采食饮水，光照制度20L:4D。饲喂两阶段玉米-豆粕型日粮，满足科宝500营养需要。每周记录体重、采食量、死亡率，计算校正饲料转化率（FCR）。

骨骼健康

35日龄时进行步态评分（Garner等2000标准）及腿骨畸形评估（Leterrier和Nys 1992方法），记录外翻（valgus）与内翻（varus）发生率。

骨骼分析

于7、14、21、28、35日龄每栏取1只鸡（每组12只/日龄），取左右胫骨。左胫骨部分用于测定干重、长度、骨中部厚度及骨强度（三点弯曲试验）；右胫骨部分进行TD宏观评分（Edwards和Veltmann 1983方法，按软骨异常程度0–3分）及组织学分析（Almeida Paz等2005方法），其余样本进行射线成像与骨密度测定（以铝当量mmAl表示）。

统计分析

数据按完全随机设计处理，使用R软件进行方差分析（ANOVA）或曼-惠特尼非参数检验，显著性水平设为p≤0.05。

结果

孵化结果与雏鸡质量

处理对孵化率、淘汰雏比例、未孵化蛋及出雏窗口无显著影响（表1）。出雏模式亦无组间差异（图1）。但联合处理组雄性雏鸡体长显著大于对照组（17.5 vs. 17.1cm, p<0.05）。

生产性能

1–35日龄体重、采食量、FCR及死亡率均无显著差异（表2）。

步态与腿骨畸形

35日龄时，步态评分（对照组1.5，处理组2.0）及外翻/内翻畸形率组间无显著差异（表3）。

胫骨软骨发育不良（TD）

7日龄时，联合处理组TD病变厚度及宏观评分显著低于对照组（p<0.05），但该差异在后续日龄中未持续。微观TD分析无组间差异（表4）。

胫骨特性

胫骨重量、厚度、长度在各时间点无显著差异（表5）。但联合处理组在1日龄和7日龄表现出更高的胫骨强度（p<0.05），其他日龄无差异。骨矿物质密度在各周期间亦无变化（表6）。

讨论

本研究未发现25(OH)D₃与MDV联合注射对孵化率、雏鸡淘汰率、未孵化蛋及出雏窗口有显著影响，与Fatemi等（2020a）、Gonzales等（2013）结果一致，但不同于Bello等（2013）及Xu等（2023）关于提高孵化率的报道，可能与注射时机、稀释剂、体积及剂量差异有关。

联合处理虽未影响35日龄生产性能，但提高了雄性雏鸡早期体长，这与Molenaar等（2008）关于体长与后期性能相关的发现部分吻合，但未转化为最终体重优势，说明25(OH)D₃效应可能仅限于早期发育阶段。

尽管联合处理降低了7日龄TD宏观评分，并提升了1和7日龄胫骨强度，但这些优势未持续至后期，与Quadros等（2021）结果一致。骨密度无组间差异，表明25(OH)D₃可能更影响骨力学特性而非矿化程度。步态评分均低于Bristol步态评分阈值3.0，反映两组鸡均具备基本运动能力。

外翻畸形率高（对照组56.4%，处理组48.1%）与文献报道一致，主要归因于快大型肉鸡遗传背景及机械应激。维生素D₃与疫苗联合使用可能通过免疫激活与骨骼代谢的交互作用部分削弱25(OH)D₃的骨骼益处，提示骨骼健康管理需结合营养、疫苗接种、遗传选育及管理策略进行多因素优化。

结论

在孵化第19天联合注射1.25μg 25(OH)D₃与马立克疫苗可增强肉鸡早期胫骨强度、降低7日龄TD发生，且不影响孵化率及35日龄生产性能，为畜禽生产中维生素D₃的合理应用提供了实践依据。