评估VITEK 2 AST-XN21系统在碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中对多粘菌素E（COL）药敏检测性能的首个cs02n版本研究

本研究首次评估VITEK 2 AST-XN21卡（cs02n版本）检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CR-Ab）对多粘菌素E（COL）药敏的性能。结果显示：与参考方法肉汤微量稀释法（BMD）相比，分类一致性（CA）达94.6%，重大误差率（VME）仅3.2%，且未检出mcr-1~5耐药基因。该系统为临床实验室提供快速可靠的COL药敏检测替代方案。

　　

ABSTRACT

本研究旨在评估VITEK 2 AST-XN21卡（生物梅里埃公司，法国）在检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CR-Ab）中对多粘菌素E（COL）药敏性能，并与肉汤微量稀释法（BMD）这一金标准进行对比。研究共纳入187株CR-Ab菌株，通过MALDI-TOF（VITEK MS）进行菌种鉴定，COL药敏分别采用BMD和VITEK 2 AST-XN21卡（cs02n版本）测定。依据欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（EUCAST）折点（敏感≤2 μg/mL；耐药>2 μg/mL）判读最小抑菌浓度（MIC），并通过内部多重PCR检测mcr-1~5耐药基因。结果显示：BMD法测得COL耐药率为16.04%（30/187），MIC₅₀和MIC₉₀分别为1 mg/L和4 mg/L。与BMD相比，VITEK 2系统的分类一致性（CA）为94.6%（177/187），基本一致性（EA）为89.1%（156/175），重大误差（VME）和主要误差（ME）率分别为3.2%（6/187）和2.1%（4/187），ISO 20776-2:2021偏倚率为3.6%。所有菌株均未检出mcr-1~5基因。

IMPORTANCE

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CR-Ab）的多粘菌素E耐药仍是全球性难题，而BMD法在常规临床微生物实验室操作繁琐。本研究首次评估VITEK 2的cs02n版本性能，结果表明VITEK 2 AST-XN21卡可作为检测CR-Ab菌株COL耐药性的可靠替代方案。

INTRODUCTION

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌（CR-Ab）被世界卫生组织列为2024年优先病原体清单中的关键组别，其全球报告病例数显著增长。CR-Ab感染治疗难度大、死亡率高，常导致医院获得性肺炎、血流感染、尿路感染等。当前CR-Ab感染治疗方案包括舒巴坦-杜洛巴坦或高剂量氨苄西林-舒巴坦，而多粘菌素E（COL）可作为联合用药选择。COL是一种多肽类抗生素，因肾毒性和神经毒性等副作用曾长期停用，现作为最后治疗手段用于联合疗法。COL耐药机制复杂，涉及pmrC、pmrE、pmrHFIJKLM等基因介导的脂多糖修饰、PhoPQ和pmrA-pmrB调控系统，以及质粒介导的mcr基因等。COL药敏检测难度较大，因大分子结构复杂且琼脂扩散性差，目前BMD是EUCAST和CLSI共同推荐的唯一参考方法。但BMD操作繁琐，临床实验室需更高效的替代方案，如COL肉汤纸片洗脱法或VITEK 2 AST-XN21等自动化系统。

MATERIALS AND METHODS

菌株选择

研究纳入2020年12月至2022年12月期间马尔马拉大学Pendik培训与研究医院临床微生物实验室收集的187株CR-Ab菌株，经MALDI-TOF MS鉴定确认，并通过Kirby-Bauer纸片扩散法验证碳青霉烯类耐药性。排除同一患者的重复菌株，所有菌株保存于-80°C脱脂奶培养基中。对BMD与VITEK 2结果不一致的菌株进行复测确认。

药敏试验

肉汤微量稀释法

按照ISO 20776和EUCAST v14指南，采用聚苯乙烯板进行BMD检测，COL浓度范围为0.125–64 mg/L。

VITEK 2 AST-XN21检测

使用0.5麦氏浊度菌悬液，按制造商说明操作VITEK 2系统（AST-XN21卡，cs02n版本）。

质量控制

以大肠杆菌ATCC 25922（COL敏感）和NCTC 13846（mcr-1阳性，COL耐药）作为质控菌株。

PCR检测耐药基因

对COL表型耐药菌株进行mcr-1~5基因PCR筛查。DNA提取采用热裂解法，PCR反应使用GM SYBR qPCR试剂盒，引物序列见表1。扩增条件：94°C初始变性15分钟；35个循环（94°C 30秒，58°C 90秒，72°C 60秒）；72°C终延伸10分钟。PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分析。

统计分析

计算基本一致性（EA）、分类一致性（CA）、重大误差（VME）、主要误差（ME）和ISO 20776-2:2021偏倚率（可接受范围：-30%至+30%）。

RESULTS

菌株主要来源于呼吸道样本（54%，110/187）和血培养（29.9%，56/187）。除COL外，菌株对碳青霉烯类（94.1%）、氨基糖苷类（95.1%）、喹诺酮类（95.1%）和哌拉西林/他唑巴坦（95.1%）耐药率高。BMD测得COL耐药率为16.04%，MIC₅₀=1 mg/L，MIC₉₀=4 mg/L。VITEK 2与BMD比较显示：CA=94.6%，EA=89.1%，VME=3.2%，ME=2.1%，偏倚率=3.6%。MIC分布见图2。所有菌株均未检出mcr-1~5基因（图3）。

DISCUSSION

本研究首次评估VITEK 2 AST-XN21卡（cs02n版本）在CR-Ab菌株COL药敏检测中的性能。菌株来源分布符合CR-Ab的临床感染特征（呼吸道感染为主）。COL耐药率（16.04%）与既往研究报道（1%-60%）一致，反映全球耐药趋势。与早期版本（cs01n）研究相比，cs02n版本表现出更优性能（CA>90%，VME=3.2%），显著优于Vourli等报道的VME=37.9%。未检出mcr基因表明COL耐药可能由pmr基因突变等染色体机制介导，与多数研究中鲍曼不动杆菌的mcr基因低检出率一致。

结论

VITEK2 AST-XN21卡在COL药敏检测中表现良好，CA>90%，VME较低（3.2%），适合临床实验室快速检测需求。但因CR-Ab感染严重性，建议对自动化系统敏感结果用BMD法复核确认。