人血小板支持Semliki Forest病毒复制：揭示血小板在α病毒感染中的潜在作用新机制

本研究为解决血小板与病毒相互作用机制不明的科学问题，开展了人血小板对Semliki Forest病毒(SFV)感染支持作用的研究。通过流式细胞术和RT-qPCR技术，首次证实血小板能有效内化SFV并支持其转录复制，nsP4 RNA表达量随时间显著增加(P<0.05)。该发现为理解α病毒（如基孔肯雅病毒CHIKV）的传播机制提供了新视角，对病毒性出血热疾病的防治具有重要启示意义。

　　

在感染性疾病研究领域，血小板传统上被认为仅是止血和血栓形成的关键细胞。然而近年研究发现，这些无核细胞在病毒感染过程中扮演着更为复杂的角色——从流感病毒到登革病毒(DENV)，血小板与病毒的相互作用不断揭示新的免疫调节功能。但令人困惑的是，作为无核细胞的血小板是否能够直接支持病毒复制，这一直是病毒学领域的未解之谜。特别是在α病毒 infections 中，血小板可能发挥的作用更是未知领域。

Semliki Forest病毒(SFV)作为正链RNA病毒(ssRNA)的经典模型，为探索这一科学问题提供了理想工具。本研究通过创新性的实验设计，首次揭示了人血小板不仅能够内化SFV，还能支持其转录复制，这一发现改写了我们对血小板功能认知的边界。

研究人员采用了几项关键技术方法：从健康成人 donors 通过密度梯度离心法制备洗涤血小板(washed platelets)，确保细胞纯度；使用表达eGFP标签的SFV nsP3-eGFP病毒株，通过流式细胞术定量病毒摄取；采用RT-qPCR技术检测病毒nsP4基因转录本动态变化；通过CD45流式染色和qPCR双重验证血小板制备物中白细胞污染低于3.5×10^-5水平。

病毒摄取分析

通过流式细胞术检测发现，血小板与SFV nsP3-eGFP共孵育3.5小时后，病毒信号较mock处理组出现统计学显著升高(P=0.0310)。

这表明血小板能够有效内化病毒颗粒，且经过洗涤步骤后仍能保留荧光信号，证明是真正的细胞内在化而非表面吸附。

病毒转录活性验证

RT-qPCR检测显示，SFV感染1小时和4小时后，nsP4 RNA表达量较mock组显著增加(P=0.0395和P=0.0198)，且呈现时间依赖性增长趋势。这一现象表明病毒在血小板内进行了主动的转录复制，而非单纯的病毒颗粒滞留。

细胞纯度验证

通过CD45-PE流式染色确认洗涤血小板中白细胞污染率仅0.019%(平均每5,263个血小板中不到1个白细胞)，同时CD45 mRNA表达量极低(相对GAPDH表达量≤3.5×10^-5)，排除了白细胞污染导致假阳性的可能。

研究结论表明，人血小板对Semliki Forest病毒具有显著的感染 permissiveness，能够支持病毒进入和转录复制过程。这一发现突破了"无核细胞不能支持病毒复制"的传统认知，揭示了血小板可能作为α病毒 replication 的新型宿主细胞。特别值得注意的是，该发现对CHIKV等致病性α病毒的研究具有重要启示——血小板可能在这些病毒的传播和致病机制中发挥尚未被认识的作用。然而研究也存在局限性：尚未验证是否产生功能性病毒颗粒，且需要进一步在CHIKV等临床相关病毒中进行验证。这项发表于《BMC Research Notes》的研究为理解病毒-血小板相互作用提供了新的分子视角，为开发针对病毒性出血热的新防治策略奠定了理论基础。