癌症相关成纤维细胞通过外泌体LncRNA PRKCQ-AS1/miR-200a-3p/MKP1轴抑制凋亡促进雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药

为解决ER+乳腺癌他莫昔芬耐药难题，研究人员开展了CAFs来源外泌体中lncRNA调控机制研究。发现CAFs通过外泌体传递PRKCQ-AS1，作为miR-200a-3p分子海绵解除对MKP1的抑制，上调MKP1通过灭活MAPK/JNK通路抑制凋亡导致耐药。该研究揭示了肿瘤微环境中CAFs介导内分泌耐药的新机制，为克服ER+乳腺癌耐药提供了新靶点。

　　

在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌的治疗中，他莫昔芬作为内分泌治疗的基石药物已应用数十年，但耐药性的出现始终是导致治疗失败和疾病复发的主要障碍。近年来，肿瘤微环境（TME）在肿瘤耐药中的作用日益受到关注，其中癌症相关成纤维细胞（CAFs）作为TME中最主要的 stromal 细胞成分，通过分泌多种因子与外泌体（exosomes）与肿瘤细胞相互作用，影响肿瘤进展和治疗反应。然而，CAFs来源的外泌体长链非编码RNA（lncRNA）在他莫昔芬耐药中的具体作用机制尚不明确。

针对这一科学问题，上海交通大学医学院附属瑞金医院陈小松、沈坤炜、唐玉杰与苏州大学蒋敏团队合作，在《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》发表了重要研究成果。研究人员通过临床样本分析、体外实验和动物模型验证，系统揭示了CAFs通过外泌体lncRNA PRKCQ-AS1/miR-200a-3p/MKP1轴调控他莫昔芬耐药的新机制。

研究采用的主要技术方法包括：从ER+乳腺癌患者和健康对照中分离培养CAFs和正常成纤维细胞（NFs）；通过超速离心提取外泌体；使用RNA测序（RNA-seq）筛选差异表达的lncRNA；采用qPCR、Western blot（WB）、双荧光素酶报告基因检测等技术验证分子机制；通过体内异种移植实验评估肿瘤生长和耐药表型；利用临床队列（n=471）和TCGA/GEO数据库进行预后相关性分析。

PRKCQ-AS1在他莫昔芬耐药ER+乳腺癌中高表达且预后不良

研究人员首先通过对4对他莫昔芬敏感与耐药肿瘤组织的RNA测序，发现PRKCQ-AS1在耐药组织中显著上调。在30对临床样本中的验证显示，PRKCQ-AS1在耐药组织中的表达明显高于敏感组织。通过152例他莫昔芬治疗患者的组织芯片分析，发现PRKCQ-AS1高表达与更短的无病生存期（DFS）和总生存期（OS）显著相关。数据库分析进一步证实，PRKCQ-AS1高表达与他莫昔芬治疗患者的不良预后相关，但在芳香化酶抑制剂治疗患者中无此相关性。

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CAFs来源的外泌体PRKCQ-AS1诱导ER+乳腺癌细胞他莫昔芬耐药

研究发现，CAFs中PRKCQ-AS1表达显著高于NFs和肿瘤细胞，且CAFs来源的外泌体中PRKCQ-AS1含量更高。将CAFs来源的外泌体与MCF-7和T47D细胞共培养后，肿瘤细胞中PRKCQ-AS1表达上调，对他莫昔芬的敏感性降低。使用Triton X-100和RNase A处理外泌体后，这种耐药诱导效应消失，表明外泌体中的RNA成分是关键介质。过表达PRKCQ-AS1的MCF-7和T47D细胞对他莫昔芬的敏感性显著降低， colony formation 实验进一步证实了PRKCQ-AS1的耐药促进作用。

PRKCQ-AS1通过上调MKP1表达促进他莫昔芬耐药

RNA测序分析发现，PRKCQ-AS1过表达细胞中MKP1（mitogen-activated protein kinase phosphatase 1）显著上调。临床样本分析显示，PRKCQ-AS1与MKP1表达呈正相关，且MKP1高表达与他莫昔芬治疗患者的较差预后相关。在PRKCQ-AS1过表达细胞中敲低MKP1后，细胞对他莫昔芬的敏感性恢复。使用MKP1抑制剂triptolide处理可逆转CAFs来源外泌体诱导的耐药表型。这些结果表明PRKCQ-AS1通过上调MKP1表达介导他莫昔芬耐药。

PRKCQ-AS1作为miR-200a-3p分子海绵上调MKP1表达

机制研究表明，PRKCQ-AS1作为竞争性内源RNA（ceRNA）吸附miR-200a-3p，解除其对MKP1的抑制作用。生物信息学预测和实验验证发现，miR-200a-3p与PRKCQ-AS1和MKP1均存在结合位点。双荧光素酶报告基因实验证实了PRKCQ-AS1与miR-200a-3p以及miR-200a-3p与MKP1之间的直接相互作用。在临床样本中，miR-200a-3p表达与PRKCQ-AS1和MKP1均呈负相关。功能实验表明，过表达miR-200a-3p可下调MKP1表达并增强他莫昔芬敏感性，而抑制miR-200a-3p则获得相反效果。

MKP1通过调控MAPK/JNK通路抑制凋亡促进耐药

基因集富集分析（GSEA）显示，PRKCQ-AS1过表达细胞中凋亡通路显著下调。流式细胞术检测发现，PRKCQ-AS1过表达细胞在他莫昔芬处理后的凋亡率显著降低，而敲低MKP1可逆转这一效应。Western blot分析表明，PRKCQ-AS1过表达细胞中他莫昔芬诱导的p-JNK、p-p38和cleaved PARP增加被抑制，而MKP1敲低可恢复这些凋亡相关蛋白的表达。这些结果说明MKP1通过去磷酸化JNK和p38，抑制MAPK/JNK通路活性，从而减弱他莫昔芬诱导的凋亡。

PAX5在CAFs中上调PRKCQ-AS1表达

研究发现，转录因子PAX5在CAFs中高表达，且与PRKCQ-AS1表达呈正相关。敲低PAX5可降低CAFs中PRKCQ-AS1的表达。双荧光素酶报告基因实验证实PAX5可直接结合PRKCQ-AS1启动子区域并促进其转录。TGF-β处理可诱导NFs向CAFs转化，伴随PAX5和PRKCQ-AS1表达上调，且TGF-β处理的NFs来源外泌体同样可诱导他莫昔芬耐药。这表明在乳腺癌TME中，TGF-β驱动NFs向CAFs转化，通过上调PAX5增加PRKCQ-AS1表达。

研究结论与意义

该研究系统揭示了CAFs通过外泌体lncRNA PRKCQ-AS1介导ER+乳腺癌他莫昔芬耐药的新机制：TME中TGF-β诱导NFs转化为CAFs，伴随PAX5上调，进而转录激活PRKCQ-AS1；CAFs通过外泌体将PRKCQ-AS1传递给肿瘤细胞；PRKCQ-AS1作为miR-200a-3p分子海绵，解除其对MKP1的抑制；MKP1通过去磷酸化作用灭活MAPK/JNK通路，抑制他莫昔芬诱导的凋亡，最终导致耐药。

该研究不仅阐明了CAFs来源外泌体非编码RNA在内分泌耐药中的关键作用，还为克服ER+乳腺癌他莫昔芬耐药提供了新的潜在靶点。PRKCQ-AS1和MKP1可作为他莫昔芬治疗患者的预后生物标志物，针对PRKCQ-AS1/miR-200a-3p/MKP1轴的干预策略可能成为逆转内分泌耐药的新治疗方向。研究首次将CAFs、外泌体lncRNA、miRNA海绵机制和MAPK信号通路调控联系起来，为理解肿瘤微环境介导的耐药机制提供了新视角，对推动乳腺癌精准治疗具有重要意义。