双探针FISH技术在蝴蝶染色体上的应用：分步操作指南

《Cell and Tissue Biology》：Dual-Probe FISH on Butterfly Chromosomes: Step-By-Step Technique

本研究针对鳞翅目昆虫染色体结构复杂导致的检测困难，创新性地采用短（28 nt）与长（1100 nt）两种探针进行双探针荧光原位杂交技术（FISH）。以蓝蝶属（Polyommatus, Agrodiaetus）的admetus malievi为模式生物，分别以18S rDNA和端粒重复序列（TTAGGn）为分子标记，通过Cy3荧光标记短探针检测端粒，生物素标记长探针结合免疫染色检测18S rDNA，实现染色体上不同遗传标记的独立定位与精准分析。该技术为鳞翅目染色体核型多样性研究提供了可靠方法。

　　

摘要

目的：某些鳞翅目昆虫群体的核型多样性与染色体重排有关，但由于鳞翅目染色体缺乏明显的着丝粒，这些重排难以被检测到。方法：本文介绍了一种在鳞翅目昆虫染色体上进行荧光原位杂交（FISH）的技术。选择Lycaenidae科的Polyommatus属（Agrodiaetus亚属）蓝色蝴蝶作为模式生物。使用18S rDNA和端粒重复序列（TTAGG)_n作为标记物。该技术的特点是使用长度不同的探针：短探针（28个核苷酸）和长探针（1100个核苷酸），并分别标记不同的报告分子：一种与荧光染料Cy3结合的探针用于检测端粒重复序列，另一种需要免疫化学检测的生物素化探针用于检测18S rDNA。结果：获得了Polyommatus属（A.) admetus malievi的18S rDNA和端粒重复序列标记物的定位数据。结论：所描述的技术能够针对研究对象独立设计特异性探针，并在鳞翅目（Rhopalocera）蝴蝶染色体上成功实施双探针FISH实验。