人类DF-2成纤维细胞的复制性衰老伴随着重编程自噬现象的发展

《Cell and Tissue Biology》：Replicative Aging of Human DF-2 Fibroblasts is Accompanied by the Development of Reprogramming Autophagy

自噬激活与细胞衰老的分子机制研究，通过流式细胞术和免疫印迹分析发现DF-2成纤维细胞 replicative衰老过程中自噬标志蛋白Atg5和LC3-II表达上调，p62降解，AMPK磷酸化增强提示mTORC1活性抑制，电镜证实自噬体积累，β-半乳糖苷酶活性升高验证衰老表型，揭示自噬在衰老重编程中的双重作用。

　　

摘要

目的：本研究旨在探讨细胞复制性衰老过程中自噬是否被激活，如果被激活，还需研究其分子机制。方法：实验对象为人眼睑皮肤真皮成纤维细胞DF-2（来源于间充质组织）。通过流式细胞术分析了细胞在各个细胞周期阶段的分布及细胞大小。利用免疫印迹技术检测了细胞内Atg5、p62、pAMPK、p-4E-BP、LC3-II蛋白的表达水平。通过CYTO-ID试剂盒和电子显微镜观察了自噬小体的数量。通过分析β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）的活性来评估细胞的衰老表型变化。结果：研究发现，人类DF-2成纤维细胞的衰老过程伴随着自噬的激活。这种类型的自噬既不具有细胞毒性，也不具有细胞保护作用。衰老的DF-2细胞体积增大，细胞周期变慢。在这些细胞中，Atg5蛋白积累增加，p62蛋白含量下降，AMPK磷酸化形式的积累增加，p-4E-BP1蛋白的合成减少，表明mTORC1激酶复合体的活性降低。此外，衰老细胞中LC3-II蛋白的膜形式和自噬小体数量增多。结论：DF-2细胞的衰老过程伴随着自噬的激活，这种自噬可能对于将正常细胞重编程为衰老表型是必要的。