靶向PI3K/Akt/NF-κB轴：CD5L介导的巨噬细胞极化免疫代谢调控在腹主动脉瘤中的作用与机制

本综述系统阐明了CD5L（分化簇5样分子）通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号轴抑制巨噬细胞M1极化在腹主动脉瘤（AAA）中的关键作用。研究结合转录组学分析（GSE47472、GSE57691数据集）和AngII灌注ApoE?/?小鼠模型，证实CD5L上调可抑制NF-κB介导的炎症反应，而敲低CD5L则加剧血管扩张和炎症介质表达。药理调控实验证明PI3K/Akt通路是CD5L抗炎作用的核心机制，为AAA的免疫代谢治疗提供了新靶点。

　　

1 BACKGROUND

腹主动脉瘤（AAA）是一种危及生命的血管疾病，其特征是腹主动脉壁的局部扩张，伴随炎症细胞浸润和血管壁退行性变化。目前缺乏有效的药物治疗手段，手术干预仍是标准治疗方法。巨噬细胞极化在AAA进展中起关键作用，促炎的M1型巨噬细胞加剧血管损伤，而M2型巨噬细胞介导抗炎修复过程。PI3K/Akt/NF-κB信号通路被公认为调控巨噬细胞表型和炎症反应的关键轴心。分化簇5样分子（CD5L）是清道夫受体半胱氨酸丰富超家族的可溶性成员，主要由巨噬细胞分泌，在脂质代谢和免疫调节中发挥广泛作用，并参与多种心血管疾病。研究表明，CD5L可通过抑制NF-κB信号促进M2极化，发挥抗炎和组织修复功能。然而，CD5L在AAA中的作用及其机制尚未明确。

2 MATERIALS AND METHODS

研究从GEO数据库获取了GSE197748、GSE47472和GSE57691数据集，涵盖人和小鼠AAA样本的转录组数据。使用CIBERSORT算法量化免疫细胞浸润水平，并通过Spearman相关分析评估CD5L与免疫细胞浸润的相关性。体内实验采用AngII灌注的ApoE^?/?小鼠模型，通过多普勒超声评估主动脉直径，组织学分析采用H&E染色、免疫组化（IHC）和免疫荧光。体外实验使用RAW264.7细胞系和人单核细胞来源的巨噬细胞（hMDMs），通过siRNA敲低和慢病毒过表达调控CD5L表达，采用Western blot、qRT-PCR、ELISA和流式细胞术分析分子表型。RNA测序和生物信息学分析用于鉴定差异表达基因（DEGs）和富集通路，GSEA验证信号通路参与。线粒体呼吸功能通过Seahorse XF分析仪评估。

3 RESULTS

3.1 CD5L在AAA中显著上调

转录组分析显示，人和小鼠AAA组织中CD5L表达均显著上调（p < 0.05）。在AngII诱导的ApoE^?/?小鼠模型中，多普勒超声显示第14天腹主动脉内径显著增加（p < 0.0001），第28天外径增大（p < 0.01）。组织学分析显示AAA小鼠主动脉壁结构严重破坏。qRT-PCR、Western blot和IHC证实AngII组CD5L表达显著上调。免疫荧光显示病变内巨噬细胞大量积聚。此外，AAA组织中VCAM-1、ICAM-1、MMP-2和MMP-9表达增加，而弹性蛋白和SM22α表达降低。

3.2 CD5L敲低加剧AAA进展

尾静脉注射CD5L siRNA显著降低小鼠CD5L表达。与siSCR组相比，CD5L敲低导致第14天最大主动脉内径和终点外径进一步增加。IHC验证siCD5L组CD5L表达显著降低。H&E染色显示siCD5L组主动脉壁破坏和血栓形成更严重。免疫荧光显示F4/80阳性巨噬细胞积聚增加。Western blot分析表明siCD5L组VCAM-1、ICAM-1、MMP-2和MMP-9上调，弹性蛋白和SM22α表达降低。

3.3 CD5L通过抑制巨噬细胞M1极化减缓AAA进展

CIBERSORT分析显示AAA与对照组样本间免疫细胞分布存在差异。Spearman相关分析显示CD5L表达与调节性T细胞、初始CD4⁺ T细胞和活化肥大细胞呈正相关，与静息记忆CD4⁺ T细胞、M1巨噬细胞和浆细胞呈负相关。体外实验证实AngII刺激同时诱导CD5L上调和M1极化增强，但时间进程分析显示两者峰值偏移：CD5L表达在刺激后持续上升，而M1标志物在18小时后下降，符合炎症后期负反馈模式。CD5L敲低增加而过表达降低RAW264.7细胞和hMDMs的M1极化，表现为基因表达、蛋白水平和细胞因子分泌的变化。在ApoE^?/?小鼠AAA模型中，CD5L敲低增加iNOS、IL-6和IL-1β mRNA表达，升高TNF-α和iNOS蛋白水平，增加血清TNF-α和IL-6浓度。免疫荧光和IHC显示腹主动脉壁iNOS阳性和TNF-α阳性巨噬细胞积聚增加。

3.4 CD5L通过激活PI3K/Akt信号通路减少AAA微环境中的巨噬细胞M1极化

RNA-seq和生物信息学分析表明，CD5L通过激活PI3K/Akt通路抑制M1极化。AngII处理的RAW264.7细胞与siCD5L转染细胞比较，鉴定出76个DEGs（39个上调，37个下调）。KEGG分析将PI3K/Akt通路列为前10个富集通路之一（p < 0.05，FDR < 0.1）。GSEA进一步证实REACTOME_PI3K_AKT_ACTIVATION通路显著富集（|NES| ≥ 1.0，名义p < 0.05，FDR < 0.25）。此外，线粒体应激分析显示AngII显著损害主动脉线粒体呼吸，降低基础OCR和ATP production。

3.5 CD5L在AAA微环境中调控PI3K/Akt/NF-κB轴

时间进程Western blot分析显示，AngII处理的RAW264.7巨噬细胞中胞质p-PI3K和p-Akt以及p-IκBα和核p-p65逐渐增加，在18小时达到峰值，24小时仍显著高于基线。PI3K抑制剂LY294002（10 μM）显著逆转AngII诱导的PI3K、Akt、IκBα和p65磷酸化，并增强p-p65核转位。CD5L敲低降低p-PI3K和p-Akt，增加p-IκBα，促进p-p65核积聚，而CD5L过表达则产生相反效应。体内实验中，AngII输注升高小鼠腹主动脉p-PI3K、p-Akt、p-IκBα和p-p65水平，这些变化被CD5L沉默逆转。IHC证实这些表达模式。这些数据表明CD5L通过激活PI3K/Akt信号抑制NF-κB活性，从而限制AAA微环境中的M1巨噬细胞极化。

3.6 CD5L通过PI3K/Akt/NF-κB轴减少M1巨噬细胞极化的机制研究

为进一步评估PI3K/Akt信号在CD5L介导的M1极化抑制中的作用，比较了AngII和LY294002组的M1标志物。qRT-PCR、Western blot和ELISA显示LY294002处理显著增加iNOS、IL-6和IL-1β表达。流式细胞术证实LY294002组CD86⁺ M1巨噬细胞比例升高。挽救实验使用PI3K激活剂740Y-P（50 μg/mL），在siCD5L + 740Y-P细胞中，与单独740Y-P相比，CD5L表达降低，伴随p-PI3K和p-Akt减少，p-IκBα和核p-p65增加，TNF-α和iNOS水平升高。与单独siCD5L相比，740Y-P共处理恢复p-PI3K和p-Akt，抑制p-IκBα和p-p65，降低TNF-α和iNOS表达。这些结果支持CD5L通过PI3K/Akt介导的NF-κB活性抑制减弱AAA中的M1极化。

4 DISCUSSION

本研究探讨了CD5L通过调控PI3K/Akt/NF-κB轴减少AAA中巨噬细胞M1极化的机制。AAA是一种复杂且未完全阐明发病机制的疾病，目前缺乏有效药物治疗方法。本研究通过整合公共转录组数据和免疫浸润分析，发现CD5L表达与多种免疫细胞亚群显著相关，与M1巨噬细胞呈负相关，表明CD5L在AAA微环境中抑制促炎巨噬细胞极化。功能实验表明CD5L敲低显著促进RAW264.7细胞和hMDMs的M1极化，伴随促炎细胞因子和趋化因子升高，而过表达抑制这些变化。在ApoE^?/?小鼠AAA模型中，CD5L敲低增加M1巨噬细胞浸润和促炎细胞因子表达。RNA-seq和生物信息学分析表明CD5L通过激活PI3K/Akt通路抑制M1极化。药理实验证实PI3K/Akt通路是CD5L抗炎作用的核心机制。这些发现为AAA的免疫代谢治疗提供了新靶点。

5 CONCLUSION

CD5L在AAA中上调，通过激活PI3K/Akt/NF-κB信号轴作为M1巨噬细胞极化的负调控因子。这种调节减少促炎细胞因子释放和血管损伤，从而缓解AAA进展。体内外证据表明PI3K/Akt通路对CD5L的抗炎作用至关重要，药理激活可部分恢复CD5L缺陷下的保护表型。这些发现表明增强CD5L活性或选择性激活巨噬细胞中的PI3K/Akt通路可能是控制血管炎症和减缓AAA发展的合理策略。