树棘蛙科无尾目性别鉴定新方法：声囊裂表达(VSE)技术助力濒危两栖动物就地与迁地保护

《Zoomorphology》：Determining sex in dendrobatid (Subfamily Dendrobatinae) anurans: a methodological description as a useful tool for in-situ and ex-situ conservation of endangered amphibians

本刊推荐：针对缺乏明显性二态性的树棘蛙科(Dendrobatinae)无尾目(Anura)物种，研究人员开发了声囊裂表达(Vocal Slit Expression, VSE)性别鉴定方法。通过系统验证8个属代表物种，证实成年雄性个体均存在可检测的双侧声囊裂，建立了一套安全高效的活体操作流程。该技术为濒危两栖动物（26/60种受威胁）的种群结构研究提供了关键工具，显著降低传统方法导致的应激风险（如糖皮质激素水平升高），推动保护生物学方法学创新。

　　

在热带雨林的隐秘角落，一群色彩斑斓的树棘蛙科(Dendrobatinae)两栖动物正面临生存危机。这个包含60个物种的类群中，竟有26种被列为受威胁物种。然而保护工作面临着一个基础性挑战：这些缺乏明显外部性征差异的蛙类很难进行活体性别鉴定。传统方法如观察求偶行为、依据体型差异或喉部变色等方法不仅可靠性存疑，更可能因长时间操作导致动物应激，甚至引发糖皮质激素水平升高或惊厥等严重后果。

面对这一难题，《Zoomorphology》最新发表的方法学论文给出创新解决方案。研究者C.A. Buttermore系统开发了声囊裂表达(Vocal Slit Expression, VSE)技术，通过对8个属代表物种的实证研究，证实该技术能快速、准确鉴定树棘蛙科活体性别。这项突破为濒危两栖动物的种群监测、繁殖管理提供了关键技术支持，尤其适用于需要最小化操作时间的野外保护和人工繁育场景。

关键技术方法

研究选取美国宠物贸易中常见的树棘蛙科物种作为样本，建立标准化操作流程。核心方法包括：使用塑料耳刮匙改良的钝头探针，配合头灯照明系统，通过六步法（准备-捕捉定位-开口-声囊裂检查-状态评估-放归观察）实现活体声囊裂检测。重点优化了下颌开启手法，避免对隅骨-齿骨造成机械损伤，整个操作过程可控制在数十秒内完成。

研究结果

历史文献验证

通过对树棘蛙科8个属的系统文献回顾，发现声囊裂检测作为性别鉴定方法已有数十年应用历史。多数研究在标本死亡后进行检测，而活体检测仅见零星报道且缺乏详细操作规范。特别值得注意的是，尽管有文献报道Adelphobates quinquevittatus部分雄性个体缺乏声囊裂，但研究者发现该结论可能源于物种误判（将Ranitomeya物种误鉴定为Adelphobates）。

声囊裂表达技术验证

研究通过四个属的代表物种（Phyllobates terribilis、Ranitomeya vanzolini、Dendrobates auratus、Oophaga pumilio）实证验证VSE有效性。所有性成熟雄性个体均显示清晰可辨的双侧声囊裂，雌性个体则呈现连续的口底组织。研究特别记录了Oophaga lehmanni个体的声囊裂表现，通过黑白对比图像突出形态特征。

雌性对照验证

对雌性Phyllobates terribilis和Oophaga物种的检测表明，探针按压舌下组织仅显示连续口底结构，无声囊裂开口。这一阴性对照为性别鉴定提供了明确判别标准。

跨亚科适用性验证

技术验证延伸至Colostethinae亚科的Epipedobates anthonyi，证实VSE方法在不同类群中具有普适性。白箭头清晰标示出声囊裂位置，显示该方法在树棘蛙科外的应用潜力。

传统方法局限性分析

通过Oophaga sylvatica繁殖对展示，传统喉囊变色法存在明显局限：雄性个体（B）虽有声囊裂（D）但无喉囊变色，雌性个体（A）则两者均无。这证实体型观察、趾盘形状（Dendrobates tinctorius雌雄平均趾盘宽仅差0.7mm）等传统方法存在主观判断风险。

讨论与结论

声囊裂表达(VSE)技术首次系统解决了树棘蛙科活体性别鉴定的技术难题。与等待求偶行为（可能数小时至数天）或依赖主观形态判断相比，VSE将鉴定时间缩短至数十秒，极大降低操作应激。方法成功验证了历史文献中关于声囊裂存在性的争议，澄清了部分误判案例（如Myers 1982年将Ranitomeya误作Adelphobates的记录）。

研究同时指出两个待解问题：Ranitomeya reticulata物种可能存在声囊裂缺失现象（文献记载41个雄性个体均未检测到声囊裂），以及声囊裂发育与性成熟年龄的关系尚未明确。这些为进一步研究指明方向。

该技术的核心价值在于其操作安全性和结果确定性，特别适合濒危物种的保护实践。通过最小化操作时间和应激风险，VSE为树棘蛙科及其近缘类群的保护生物学研究提供了方法学范本，对理解种群结构、实施精准保护干预具有重要实践意义。随着两栖动物濒危物种比例持续升高，此类非损伤性技术的重要性将日益凸显。