鱼精蛋白修饰沙门氏菌原位富集递送STING激动剂cGAMP以增强癌症免疫治疗

本研究创新性利用鱼精蛋白修饰减毒沙门氏菌（VNP-PRM），通过静电作用富集放疗后肿瘤微环境中释放的内源性STING激动剂cGAMP，并借助细菌固有运动性和细胞侵袭能力将cGAMP高效递送至肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），显著激活STING通路诱导M1型极化（体外83.8%，体内34%），协同细菌免疫原性激发抗肿瘤免疫应答，为原位利用内源性免疫分子提供新策略。

Section snippets

Preparation and cGAMP enrichment characteristics of VNP-PRM

研究表明癌细胞在稳态下持续分泌cGAMP（2′,3′-环磷酸鸟苷-腺苷酸），并在电离辐射处理后显著增加分泌量。为验证放疗后肿瘤细胞释放cGAMP的水平，我们通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测了不同辐射剂量下小鼠胃贲门癌细胞（MFC）上清液中的cGAMP浓度。cGAMP水平通过将放疗后上清液中的cGAMP与相同细胞数量的基准值进行标准化定量。

Conclusions

总之，我们成功制备并验证了鱼精蛋白修饰的减毒沙门氏菌（VNP-PRM）作为载体，用于在肿瘤部位富集和递送放疗诱导的cGAMP。VNP-PRM在体内外均展现出cGAMP富集和递送能力，这归功于鱼精蛋白与cGAMP之间的静电相互作用，以及VNP-PRM固有的运动性和细胞侵袭特性。这些效应凸显了VNP-PRM在增强放疗后cGAMP摄取方面的生物学功能。

Materials and reagents

2′,3′-cGAMP钠盐（cGAMP, SML1229）和鱼精蛋白（P4005）购自Merck公司（德国达姆施塔特）。荧光标记cGAMP（cGAMP-Fluo, c195）由Biolog生命科学研究所（德国不来梅）提供。巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF, HY-P7085）购自MedChemExpress（美国新泽西）。聚乙烯亚胺（PEI）、壳聚糖（CHI）、聚（β-氨基酯）等材料均通过标准商业渠道采购。

CRediT authorship contribution statement

Yanjun Lu: 原稿撰写、可视化、方法论构建、概念设计。Zhiyan Li: 文稿修订、方法论优化、实验调研。Hanxiao Xu: 方法论支持。Qingwei Zeng: 方法论实施。Xudong Zhu: 实验调研。Kai Chen: 实验调研。Wenxuan Zheng: 实验调研。Song Liu: 文稿修订、项目监督、资金获取。Wenxian Guan: 文稿修订、项目监督、资金获取。Jinhui Wu: 文稿修订、项目监督、资金管理。

Declaration of competing interest

作者声明不存在利益冲突。

Acknowledgements

Yanjun Lu和Zhiyan Li对本工作贡献相等。感谢国家自然科学基金（82172645、82372805至W.G.）、南京市卫生健康委员会重点项目（ZKX24013至S.L.）、南京鼓楼医院国家自然科学基金青年基金培育计划（2023-JCYJ-YP-02至S.L.）的资助。