综述：遗传性视网膜疾病的反义寡核苷酸疗法：全面综述

本综述系统探讨了反义寡核苷酸（ASO）在治疗遗传性视网膜疾病（IRD）中的前沿进展，涵盖其作用机制（如剪接调控、翻译阻断）、化学修饰（如硫代磷酸酯骨架、2′-MOE/2′-OMe糖修饰）、递送策略及临床转化挑战（如脱靶效应、长期安全性），为精准靶向治疗提供了新范式。

　　

MECHANISM of ACTION and CHEMISTRY

反义寡核苷酸（ASO）的作用机制始于近五十年前Zamecnik和Stephenson的开创性研究，他们首次证明单链ASO可通过结合Rous肉瘤病毒mRNA阻断蛋白质翻译。ASO通过序列特异性杂交靶向(pre-)mRNA，通过多种机制调控基因表达：剪接调制（如外显子跳跃或内含子保留）、翻译抑制（通过空间阻碍核糖体）或RNA降解（通过RNase H1招募）。其化学修饰的演进大幅提升了治疗效能——硫代磷酸酯（phosphorothioate, PS）骨架增强核酸酶抗性及蛋白结合能力；2′-糖修饰（如2′-MOE、2′-OMe、LNA）增加对靶RNA亲和力并降低免疫原性；GalNAc共轭技术促进肝细胞靶向，但视网膜应用仍依赖局部给药（如intravitreal注射）。最新一代化学修饰（如cEt-BNA、PMO）进一步优化了特异性、稳定性和毒性谱。

Current Preclinical and Clinical Development of ASOs for IRDs

目前已有5种ASO候选药物进入临床研究：sepofarsen（靶向CEP290 c.2991+1655A>G深内含子变异，用于LCA10）、ultevursen（QR-421a，靶向USH2A外显子13跳跃，用于Usher综合征）、QR-1123（靶向RHO p.P23H显性负效突变）、nL-FLVC-001（靶点未公开）及VP-001（详情待公布）。sepofarsen在早期试验中展现视力改善，但IIb/III期ILLUMINATE研究未达主要终点，突显了临床转化的复杂性。临床前模型（如患者来源iPSC视网膜类器官、非人灵长类动物）验证了ASO的剪接校正效率与安全性，例如ultevursen在视网膜类器官中成功恢复USH2A蛋白表达。

CHALLENGES and LIMITATIONS

ASO疗法面临多重挑战：IRDs的遗传异质性（>330个基因）要求个体化设计；脱靶效应可能导致不可预见的毒性；视网膜内层细胞（如神经节细胞）的递送效率低；长期安全性与免疫原性（如TLR激活）数据缺乏。此外，深内含子变异或大片段缺失等基因型可能不适于ASO干预。模型系统的局限性（如啮齿类动物与人类视网膜差异）亦制约临床前预测准确性。

Advancements in model systems

新兴患者来源模型正推动ASO preclinical开发：iPSC视网膜类器官可模拟人类疾病表型；诱导光感受器样细胞（如患者成纤维细胞衍生）成功用于测试BEST1等位基因特异性ASO（突变等位基因敲低率达70%）；3D视网膜培养系统支持高通量药物筛选。非人灵长类动物模型提供更贴近人类的药代动力学数据，例如Vázquez-Domínguez等通过比较不同化学修饰ASO在小鼠视网膜分布，推荐2′-MOE-PS或LNA-PS架构用于视网膜靶向。

Conclusion

ASO疗法通过靶向RNA机制（剪接调制、等位基因沉默等）为IRDs提供了精准医疗新途径。局部眼内给药优势（低系统暴露、高视网膜生物利用度）加速其临床转化。尽管sepofarsen三期试验受挫，USHER2A、RHO等靶点研究仍在推进。未来需优化化学设计、递送效率及N-of-1开发框架，以兑现个体化治疗潜力。

CRediT authorship contribution statement

Hossein D. Banadaki: 原稿撰写、调查、概念化；Alejandro Garanto: 审阅编辑、监督；Rob W.J. Collin: 审阅编辑、监督。

Funding

H.D.B.获Horizon Europe Marie Sk?odowska-Curie Doctoral Network ProgRET资助（No. 101120562）；R.W.J.C.获Foundation Fighting Blindness Translational Research Acceleration Award支持（TA-GT-0521-0799-RAD-TRAP）；A.G.获Human Measurement Models 2.0计划资助（grant nr. 18958）及Proefdiervrij贡献。