磷酸化依赖的SERRATE降解调控植物miRNA代谢平衡新机制

本研究揭示拟南芥Casein kinase 1同源激酶AELs通过磷酸化核心RNA加工蛋白SERRATE（SE）的Thr21/Ser355位点，促进其与20S蛋白酶体亚基PAG1互作从而加速降解，并破坏SE-HYL1互作抑制 microprocessor复合体组装，为理解翻译后修饰调控miRNA稳态提供了新机制。

　　

在真核生物中，microRNA（miRNA）作为一类长度约20-21核苷酸的非编码RNA，通过调控靶基因表达在生长发育、营养应答、免疫防御和干细胞特性维持等过程中发挥关键作用。虽然动物细胞中的miRNA加工过程发生在细胞核和细胞质中，但植物细胞却专门在细胞核中完成这一过程。该过程由dicer-like 1（DCL1）酶驱动，并需要多个关键蛋白的协同作用，包括锌指蛋白SERRATE（SE）和双链RNA结合蛋白hyponastic leaves 1（HYL1）。这些蛋白共同协作以确保miRNA的高效成熟。

植物SE蛋白作为哺乳亚砷酸盐抗性蛋白2（Ars2）的同源物，在RNA代谢中扮演多重角色。它不仅参与转录、多聚腺苷酸化、miRNA生物合成，还涉及选择性剪接（AS）和RNA降解等过程。其中最显著的功能是与DCL1和HYL1在dicing bodies（D-bodies）中合作生成miRNA。SE通过增强DCL1的酶活性，促进pri-miRNA在细胞核内精确有效地加工为成熟miRNA。SE的液-液相分离（LLPS）特性对D-body的形成至关重要，它能够招募DCL1和HYL1蛋白。此外，SE可能作为支架蛋白，形成和组织各种RNA加工体，引导核心加工机制（包括DCL1/HYL1）靶向适当的RNA底物，从而促进体内miRNA的生成。

除了RNA沉默功能，SE还在pre-mRNA剪接、非编码RNA生物合成、RNA转运和稳定性等RNA代谢的多个方面发挥关键作用。SE还通过调节与盐胁迫相关基因的剪接参与逆境响应。SE转录本通过招募染色质重塑因子2（CHR2）改变pri-miRNA的二级结构来调控miRNA产生。SE还与参与miRNA生物合成的转录输出（TREX）复合物亚基及核外泌体靶向（NEXT）复合物相互作用，促进pri-miRNA降解。

尽管研究表明SE在RNA代谢中起关键作用，并通过蛋白质相互作用调控miRNA代谢的多个过程，但调控SE和miRNA代谢的潜在翻译后修饰仍 largely unexplored。蛋白质磷酸化作为一种关键的翻译后修饰，通过调节底物蛋白的构象变化、亚细胞定位、活性和稳定性来调控众多生理过程。研究表明蛋白质磷酸化在调节miRNA生物发生中发挥作用。HYL1同时受到MPK3（丝裂原活化蛋白激酶3）和SnRK2（蔗糖非发酵[SNF1]相关蛋白激酶第2组）的磷酸化，这两种激酶对HYL1积累和体内miRNA水平产生相反的影响。最近研究发现SE/Ars2是内在无序蛋白（IDPs），通常在大分子复合物中稳定存在。过量或未组装的SE/Ars2通过泛素非依赖途径被20S蛋白酶体α亚基G1（PAG1）或其哺乳动物同源物20S蛋白酶体亚基α3型（PSMA3）靶向降解。然而，启动SE/Ars2降解的信号仍未被识别。Pre-mRNA加工4激酶A（PRP4KA及其旁系同源物PRP4KB和可能的PRP4KC）通过磷酸化维持SE积累的平衡，确保其体内正常功能的保持。

酪蛋白激酶1（CK1）是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在真核生物中高度保守。研究表明CK1参与生长发育的多个生理过程，包括细胞增殖、昼夜节律、激素效应、囊泡运输、DNA修复、生长和形态发生。本研究团队先前的研究表明，水稻early flowering 1（EL1）（一种植物特异性CK1）通过抑制赤霉素信号延迟水稻抽穗。拟南芥基因组包含四个拟南芥EL1样蛋白（AELs），它们能够磷酸化多种底物，包括ABA受体pyrabactin resistance 1（PYR1）/PYR1-like（PYL）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂kip-related protein 6（KRP6）。最近基于DIA的磷酸化蛋白质组学分析为识别和研究AEL底物功能提供了丰富的数据集。

本研究证明AELs通过磷酸化SE调控miRNA代谢，从而增强其与PAG1的亲和力，通过20S蛋白酶体促进SE在植物体内的降解。AEL介导的磷酸化不影响SE的相分离能力，但减少了HYL1向液滴中的招募，影响D-body的组成，从而平衡miRNA代谢。这一发现通过阐明SE的磷酸化调控机制，为深入理解正确miRNA加工的复杂性提供了重要见解。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：利用定量DIA磷酸化蛋白质组学筛选AELs的候选底物；通过酵母双杂交、双分子荧光互补（BiFC）和免疫共沉淀（Co-IP）验证蛋白互作；采用体外激酶 assay和LC-MS/MS鉴定磷酸化位点；利用sRNA-seq和RNA-seq进行转录组分析；通过细胞-free降解 assay和环己酰亚胺（CHX）处理评估蛋白稳定性；使用体外液滴形成实验研究相分离特性；通过RNA电泳迁移率变动分析（EMSA）检测RNA结合能力。

AELs通过与SE相互作用调控miRNA代谢

通过定量DIA磷酸化蛋白质组学分析，研究人员从AELs表达增强或缺陷的拟南芥幼苗中收集蛋白质，鉴定出多个参与miRNA代谢的AELs候选底物，表明AELs在RNA调控、剪接体或运输中的潜在功能。选择参与RNA生物合成和剪接的蛋白质进行酵母双杂交分析，证明SE与AEL蛋白（AEL1-4）之间存在相互作用。进一步的BiFC assay通过将YFP标记的AEL1-4（AEL-nYFP）和SE（SE-cYFP）的N端或C端片段转化本氏烟叶片，在细胞核中观察到清晰的YFP荧光，表明SE在体内与AEL1-4相互作用。Co-IP assay通过在本氏烟中共表达SE-mCherry和Flag-AEL1，证明从抗mCherry琼脂糖珠回收的免疫沉淀物中含有Flag-AEL1，证实了SE-AEL在植物体内的相互作用。

对幼苗生长的检查发现，虽然AEL单突变或双突变体的营养生长没有显著变化，但缺乏多个AELs的三重突变体（ael123、ael124和ael134）或过表达AELs（AEL3-OE和AEL4-OE）的幼苗表现出显著的发育异常，包括生长缓慢的叶片或卷曲的子叶和莲座叶，与se-1突变体的表型相似。将AEL1、AEL2或AEL4的基因组片段导入ael124突变体可恢复表型缺陷，表明AELs通过调节miRNA代谢冗余调控植物发育。qPCR分析显示，在AEL4的互补表达下，ael124中特定miRNA的增强表达得到恢复。

通过sRNA测序（sRNA-seq）分析检查小RNA的分布，结果显示AEL4-OE中miRNA丰度显著降低。对miRNA谱的详细比较表明，在303个注释的miRNA物种中，140个miRNA在AEL4-OE中表现出至少1.5倍的减少，而只有10个显示1.5倍的增加。值得注意的是，在AEL4-OE中下调的140个miRNA中，有135个在se-1突变体中也受到抑制，而在AEL4-OE中上调的10个miRNA中有7个在se-1中同样增加，证明与SE依赖性miRNA存在一致的重叠。sRNA印迹assay证实了miRNA（包括miR156、miR159、miR172、miR398、miR408和miR822）在AEL4-OE中的转录水平降低，与se-1中观察到的结果一致。这些发现表明在AEL4过表达下，SE介导的miRNA生物发生受损。一致地，Col-0和ael124中miRNA谱的比较显示，与Col-0相比，ael124中miRNA丰度普遍增加，并通过sRNA印迹分析得到验证。类似地，ael124中下调和上调的miRNA与SE依赖性miRNA存在重叠。进一步比较在AEL4-OE中下调的miRNA与在ael124中上调的miRNA显示存在重叠且具有统计学意义。这些结果表明AEL突变体中miRNA积累增加，与AEL过表达下miRNA减少形成对比，表明AELs调节miRNA生物发生的平衡。

miRNA通过结合靶mRNA抑制转录后基因表达。为了研究AELs是否表现出SE依赖性效应，对Col-0、se-1和AEL4-OE的三周龄幼苗进行了RNA-seq分析。转录组的比较分析显示，除AS2外，参与miRNA通路的基因转录水平没有变化，但对应于下调miRNA的靶转录本积累显著增加，表明在AEL4过表达下SE介导的miRNA生物发生受损。共有2366个基因在AEL4-OE中显著上调，1328个基因在se-1中上调，其中274个基因在AEL4-OE和se-1中均上调。此外，在1970个AEL4-OE下调基因中，有149个在se-1中也减少，强调了SE在调节基因转录中的核心作用。尽管在AEL4-OE和se-1之间显示显著一致性的差异表达基因（DEGs）数量有限，但仍有大量基因在不同功能类别中在AEL4-OE或se-1中差异表达，表明AELs也可能以SE非依赖性方式调节基因转录。

为了进一步研究AELs对miRNA表达的影响，使用表达pMIR172-GUS的转基因系（将纯合Col-0过表达pMIR172-GUS的品系与ael124和AEL4-OE杂交）分析了miR172a在AEL4-OE和ael124中的表达模式。结果显示，与Col-0相比，AEL4-OE中GUS表达显著降低，而ael124中显著增加，并通过qPCR分析证实。这些发现表明AEL4-OE中miRNA产生减少可能也源于pri-miRNA转录减少，表明AELs在內源基因表达中直接或间接在转录水平发挥作用。

研究了AELs在AS中的参与及其对SE介导的pre-mRNA剪接的影响。使用rMATS软件分析se-1、AEL4-OE和ael124与Col-0之间可变剪接事件的差异，发现这些突变体中存在大量AS事件，突显了全局剪接缺陷。比较分析显示AEL4-OE和ael124与se-1相比在剪接事件上存在相当程度的重叠，表明潜在的共享调控机制。有趣的是，AEL4-OE和ael124在剪接事件上存在重叠，这加强了AELs在AS中起重要作用的观点。通过选择代表性例子，检查Integrative Genomics Viewer（IGV）文件手动识别出这些样品中大量剪接缺陷的转录本，随后通过RT-PCR分析验证。这些发现证实AELs通过调节SE功能调控pre-mRNA剪接。由于在AEL表达改变的幼苗中大量基因发生独立于SE的AS，特别是从磷酸化蛋白质组学研究中检测到几种剪接因子的磷酸肽，我们不能排除AELs作用于不同剪接因子的可能性。

AELs通过直接磷酸化Thr21和Ser355影响SE功能

鉴于AELs被鉴定为蛋白激酶及其与SE的相互作用，研究人员探讨了AELs是否磷酸化SE。体外激酶实验显示AEL1强烈磷酸化SE。为了鉴定磷酸化位点，将AEL1磷酸化的SE从SDS-PAGE中分离，进行胰蛋白酶消化，并通过LC-MS/MS分析以确定磷酸化位点。该分析鉴定出两个位点，Thr21和Ser355，与计算分析的预测一致。进一步的体外磷酸化实验采用Thr21、Ser355或两者均被丙氨酸取代的SE变体，显示AEL1的磷酸化显著减少，表明Thr21和Ser355是AELs磷酸化SE的主要位点。

通过转化或杂交（将纯合se-1过表达mCherry-SE的品系与ael124杂交）生成在不同遗传背景中表达mCherry-SE的转基因系。使用具有可比SE表达水平的幼苗（通过qPCR验证），用抗mCherry珠进行免疫沉淀，然后用抗磷酸化（Ser/Thr）抗体进行免疫印迹，显示与se-1相比，ael124中SE磷酸化显著减少，这证实AELs在植物体内磷酸化SE。此外，我们生成se-1幼苗表达在Thr21、Ser355或两者均被丙氨酸取代（T21A或S355A）的SE变体，由SE天然启动子驱动并标记mCherry。用抗磷酸化（Ser/Thr）抗体进行免疫印迹分析显示，与SE相比，SE变体的磷酸化显著减少，证实鉴定的两个位点在植物体内被AELs磷酸化。

为了检查磷酸化对SE体内功能的影响，我们生成se-1幼苗表达模拟非磷酸化（SET21AS355A和SE2A）或持续磷酸化（SET21DS355D和SE2D）的SE变体，由SE天然启动子驱动并标记mCherry。我们的观察显示mCherry-SE和mCherry-SE2A完全挽救了se-1的发育缺陷，而mCherry-SE2D不能。随后对特定成熟miRNA（miR156、miR159、miR164、miR172和miR408）的qPCR分析显示，与Col-0相比，se-1中表达减少，通过表达mCherry-SE和mCherry-SE2A恢复，但mCherry-SE2D不能恢复。此外，对检查的miRNA各自靶基因SMZ、SPL10、NAC1、MYB33和ARPN的表达水平分析显示，miRNA表达水平与其相应靶标之间存在负相关。在se-1中未检测到SE蛋白，以及表达磷酸化模拟SE变体的幼苗的一致表型，证实AELs通过磷酸化影响SE在体内对miRNA代谢的功能。

为了区分Thr21和Ser355对SE功能的个体贡献，观察表达单点突变（T21D/A或S355D/A）SE变体的se-1幼苗显示这些变体可以有效挽救se-1的发育缺陷。一致地，qPCR分析显示检查的miRNA（miR156、miR159、miR164、miR172和miR408）及其各自靶基因的表达水平通过表达这些SE变体恢复。这些结果证明了Thr21和Ser355在调节SE功能中的冗余作用。

此外，在Col-0中表达低磷酸化（SE2A）和高磷酸化（SE2D）变体，对幼苗生长的观察显示表达mCherry-SE和mCherry-SE2A时没有显著差异，然而mCherry-SE2D表达导致发育缺陷。qPCR分析表明，表达mCherry-SE2D的幼苗中特定miRNA（miR156、miR159、miR164、miR172和miR408）的表达减少，与se-1相似。这伴随着相应靶标的表达增加，证实了AEL介导的磷酸化在SE调控的miRNA代谢中的关键作用。

AEL介导的磷酸化通过影响与20S蛋白酶体的关联对SE稳定性至关重要

研究人员随后研究了磷酸化影响SE功能的作用机制。磷酸化可能影响底物蛋白的活性、稳定性或构象，从而调节相关的生理过程。利用来自Col-0、ael124和AEL4-OE提取物中纯化的His-SE进行细胞-free assay，蛋白质印迹分析显示，与Col-0相比，AEL4-OE中SE蛋白降解显著加速，而在ael124中明显减慢。这一发现表明AEL介导的SE磷酸化加速其降解，这与AEL过表达下观察到的SE功能抑制一致。

通过用环己酰亚胺（CHX）处理抑制蛋白质合成，我们进一步验证了磷酸化对SE体内降解的影响。在Col-0中，SE蛋白水平在8小时后下降至约一半，而在ael124中，SE水平显示最小变化，表明SE处于稳定状态。在AEL4过表达下，观察到SE丰度显著降低，在6小时达到一半，在8小时下降至约20%。这些发现强调了磷酸化诱导的SE蛋白加速降解。

此外，通过细胞-free assay研究了SE和SE变体在ael124或AEL4-OE中的稳定性。与在不同背景中SE的持续降解相比，His-SE2A的降解显著减少，特别是在ael124中，而His-SE2D的降解加速，特别是在AEL4-OE和Col-0中。这表明AEL介导的T21和S355磷酸化与SE稳定性调节密切相关。此外，生成在se-1背景中表达SE、SE2A和SE2D的植物。分析证实SE2D在体内降解显著增强，进一步证实了AEL介导的磷酸化在促进SE降解中的关键作用。

SE蛋白通过其与PAG1的相互作用经由泛素非依赖的20S蛋白酶体途径降解，而不是泛素依赖的26S蛋白酶体。酵母双杂交分析证明SE、SE2A和SE2D与PAG1相互作用。然而，基于液体的assay显示SE2D与PAG1之间的相互作用显著增加。这一发现进一步被pull-down assay证实，显示SE2A与PAG1的相互作用 substantially reduced。这些结果表明AELs对SE的磷酸化增强了SE与PAG1之间的相互作用，从而促进SE招募到20S蛋白酶体中。为了进一步剖析磷酸化在调节SE-PAG1相互作用中的调控作用，我们研究了PAG1与单点突变（T21D/A和S355D/A）SE变体的相互作用。酵母双杂交和pull-down assay显示，单点突变的SE变体与PAG1的相互作用介于SE和SE2A/SE2D之间，表明两个位点都对SE-PAG1相互作用的调节有贡献。

AEL介导的磷酸化减弱SE与HYL1的相互作用

鉴于SE与HYL1在D-body中合作处理pri-miRNA，研究人员研究了AEL介导的磷酸化是否影响SE-HYL1相互作用。酵母双杂交分析显示SE与HYL1强烈相互作用，而SE2D与HYL1的相互作用显著减少，SE2A与HYL1的相互作用增强。Pull-down assay进一步证实了这些发现，显示与SE相比，SE2D与HYL1的结合减少，而SE2A的结合增加。这些结果表明AEL介导的磷酸化负调控SE-HYL1相互作用。

为了研究磷酸化对SE-HYL1相互作用的个体贡献，进行了酵母双杂交和pull-down assay检查单点突变SE变体与HYL1的相互作用。结果显示，与SE相比，SE-T21D和SE-S355D与HYL1的相互作用减少，而SE-T21A和SE-S355A的相互作用增强，表明两个位点都有助于调节SE-HYL1相互作用。

鉴于SE作为IDP的特性及其形成液-液相分离（LLPS）液滴的能力，研究人员探讨了磷酸化是否影响SE的相分离行为。体外液滴形成实验显示，BFP-SE和BFP-SE2D在类似条件下均能形成液滴，荧光恢复 after photobleaching（FRAP）分析显示BFP-SE和BFP-SE2D液滴具有相似的恢复动力学，表明磷酸化不影响SE的相分离能力。然而，当将mCherry-HYL1添加到BFP-SE或BFP-SE2D中时，与BFP-SE液滴相比，BFP-SE2D液滴中mCherry-HYL1的掺入显著减少。当将GFP-AEL1添加到BFP-SE和mCherry-HYL1的混合物中时，SE液滴中的HYL1-mCherry信号显著减少，进一步表明AEL1抑制SE将HYL1招募到相分离液滴的能力。

推测磷酸化可能诱导SE的构象变化，导致与HYL1的分子间相互作用减少，从而削弱它们的关联。利用AlphaFold3检查SE或SE变体与HYL1的分子结构和相互作用动力学，并使用PyMOL评估预测的结构。与SE和HYL1之间的界面相比，表面模型显示SE2D和HYL1之间的界面减少。同时，SE2D和HYL1界面之间的氢键数量普遍减少。结构模型的进一步定量分析显示，SE和HYL1之间的界面由834个原子、98个氢键和6828.117 ?2的界面面积组成，而SE2D和HYL1之间的界面由480个界面原子、54个氢键和4063.853 ?2的界面面积组成。此外，我们生成了在T21和S355添加磷酸基团的高度准确SE结构模型（SE2P），SE2P和HYL1之间的界面包括402个界面原子、30个氢键和3176.024 ?2的界面面积，与SE2D相似。这些发现表明磷酸化SE与HYL1之间的分子间力减弱，表明磷酸化抑制SE-HYL1相互作用。

进一步分析使用MutaBind2计算突变时结合亲和力的变化，显示△ΔG值为0.37，正号表明SE2D和HYL1之间结合亲和力 predicted decrease。为了研究单点磷酸化的影响，我们生成了在T21或S355添加磷酸基团的SE结构模型，并分析了SE与HYL1的相互作用。SET21-P和HYL1之间的界面包括628个界面原子、42个氢键和8074.483 ?2的界面面积，SES355-P和HYL1之间的界面包括619个界面原子、34个氢键和8002.804 ?2的界面面积。此外，MutaBind2分析显示SE的T21D和S355D单点突变的ΔΔG值分别为0.06和0.16。这些结果表明两个位点的磷酸化对SE-HYL1相互作用都有关键作用。

讨论

先前研究已确立SE作为RNA代谢中的关键调控因子，并阐明了AELs通过磷酸化调节多种生理过程的重要作用。本研究表征了AELs通过SE磷酸化维持miRNA代谢平衡的新功能。我们的研究结果表明，AELs直接磷酸化SE蛋白的两个特定位点（Thr21和Ser355），增强SE与PAG1之间的亲和力，从而通过20s蛋白酶体促进SE降解。此外，这种磷酸化抑制HYL1被SE招募到液滴中进行D-body组装， consequently suppressing成熟miRNA加工和植物营养生长。这项研究强调了AEL介导的磷酸化在维持SE稳态中的重要性，为miRNA代谢的调控机制提供了宝贵见解。

SE被表征为一种IDP，作为形成各种复合物的支架，其稳定性对正常功能至关重要。PRP4KA-C在无序结构域内磷酸化位点，促进SE形成不溶性蛋白沉积（IPDs）并导致其快速降解。然而，SE稳态维持的机制仍知之甚少。我们的研究表明CK1s/AELs通过磷酸化抑制SE稳定性，这增加了与PAG1的亲和力，并显著增强了对IDPs稳定性调节的理解。先前研究表明，响应环境胁迫，许多miRNA的产生通过包括SE在内的miRNA加工成分的动态调整被重编程。AELs通过磷酸化调节SE稳定性可能为植物响应环境刺激提供一种机制。

与PRP4KA-C相比，AELs通过一种 distinct pattern调节SE稳态。PRP4KA在多个残基（至少五个鉴定出的残基）磷酸化SE，而AELs特异性磷酸化SE的Thr21和Ser355。PRP4KA的敲低导致过度积累的低磷酸化SE，由于干扰功能大分子复合物的组装， paradoxically损害miRNA加工。这些差异表明PRP4KA-C可能维持最佳SE水平以避免未折叠SE的过度积累，而AELs通过靶向降解SE调节miRNA加工，AELs可能作为微调调节器。CWC15可能作为一个平台，通过其与PRP4KA激酶的相互作用促进SE磷酸化，并促进非功能性SE通过20S蛋白酶体降解，从而有助于维持SE稳态。CWC15和AELs都有助于SE的正确磷酸化和周转，这对于维持微处理器稳态和确保准确的miRNA生物发生至关重要。

磷酸化对SE的功能不仅限于蛋白质稳定性。最近研究表明SE可能作为支架或促进LLPS并指导核心miRNA加工机制。LLPS是一种重要的细胞过程，它在特定细胞区室或液滴中组织蛋白质聚集，调节基因转录和细胞对胁迫的响应。我们的发现通过证明AEL介导的磷酸化不仅 destabilizes SE，而且破坏其与HYL1相互作用的能力，将这种生物物理特性与翻译后调控联系起来。磷酸化SE表现出减少将HYL1招募到液滴中的能力，这与结构分析一致，显示结合面积和SE与HYL1之间的相互作用动力学均减少。这突出了磷酸化在控制miRNA加工空间组织中的重要性，并表明AELs可能通过磷酸化参与D-bodies的精确组装和微调的miRNA加工。蛋白质的IDRs通常作为调控枢纽，对蛋白质-蛋白质相互作用的动态调控至关重要，并可促进聚集。磷酸化是IDRs最常见和研究最广泛的翻译后修饰之一，影响相分离液滴的形成并调节蛋白质复合物的组装。磷酸位点Thr21位于SE的IDR中，表明IDR的磷酸化在调节结构特性和SE在LLPS中的功能方面至关重要，从而影响HYL1向液滴中的招募。这表明SE稳定性和LLPS行为可能是耦合的：磷酸化诱导的去稳定化损害SE形成或维持相分离区室的能力，从而削弱微处理器组装和miRNA产生。

miRNA在动物和植物中均发挥关键调控作用。我们的研究证明了AELs通过SE磷酸化在调节miRNA加工中的重要作用，为了解CK1/AEL介导的磷酸化在各种真核物种中平衡miRNA代谢的功能提供了见解。然而，这种机制是否在物种间保守尚不清楚。最近对果蝇和哺乳动物中SE同源物Ars2的研究表明，在正常生理条件下Ars2主要以低磷酸化状态存在，尽管磷酸化对Ars2功能的影响仍有待阐明。CK1激酶在真核生物中高度保守，但CK1s通过调节不同靶蛋白在miRNA加工中的功能和潜在机制尚不清楚。一些CK1成员位于质膜或细胞质中，并且与植物不同，哺乳动物中的miRNA加工发生在细胞核和细胞质中。CK1s和Ars2在细胞质中相似的亚细胞分布和比较分析显示，AELs靶向的SE中磷酸化位点S355在Ars2中高度保守（S553），表明CK1s磷酸化Ars2或与哺乳动物中miRNA复合物相互作用的可能性很高。

研究的局限性

我们的研究确定AELs在Thr21和Ser355磷酸化以促进SE降解并破坏其