水溶性壳聚糖共价修饰溶葡萄球菌素:酶稳定性与催化性能的协同增强机制研究
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时间:2025年10月02日
来源:International Journal of Biological Macromolecules 8.5
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本研究创新性地采用水溶性壳聚糖(CS)对溶葡萄球菌素(LYS)进行共价修饰,显著提升了酶的热稳定性、pH耐受性和储存稳定性。CS-LYS复合物在60°C处理60分钟后仍保留51%活性(天然酶仅10%),且动力学分析显示其底物亲和力显著增强。光谱学证据表明CS通过氢键网络和疏水微环境稳定酶高级结构,为长效酶类抗菌剂的开发提供了新策略。
溶葡萄球菌素(LYS);金黄色葡萄球菌(指示菌,菌株号:217–185);水溶性壳聚糖(CS,脱乙酰度>92%,分子量30,000–60,000)由北京酷尔生物科技有限公司提供;高碘酸钠(NaIO4,分析纯,99.5%)购自国药集团化学试剂有限公司;硫酸铵((NH4)2SO4,分析纯,99.3%)由上海昊弘生物医药科技有限公司提供。
将大肠杆菌BL21/pET22b(+)-Opt-lys 4–18接种至含氨苄青霉素的LB培养基中。
Activity and electrophoresis of CS-modified LYS
在相同条件下,分别测定LYS、CS-LYS、单独CS(无LYS)以及CS与LYS物理混合物的活性。结果显示,壳聚糖修饰的溶葡萄球菌素(CS-LYS)比活性显著高于未修饰LYS或单独CS(**:P?0.01)。值得注意的是,CS与LYS物理混合后立即形成白色沉淀,导致样品无法用于活性测定。
葡萄球菌溶葡萄球菌素具有广阔的医学和工业应用前景。化学修饰可改善其稳定性差和半衰期短的问题,但如何平衡酶蛋白的稳定性与活性仍是技术瓶颈。例如,PEG修饰的L-天冬酰胺酶和L-谷氨酰胺酶虽增强了胰蛋白酶抗性和热稳定性,但其催化活性降至野生型的82%。
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