SLC7A6在谷胱甘肽二硫化物转运与铁死亡调控中的结构表征与功能作用研究
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时间:2025年10月02日
来源:International Journal of Biological Macromolecules 8.5
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本研究深入解析了SLC7A6蛋白的结构特征及其在谷胱甘肽二硫化物(GSSG)转运与铁死亡(Ferroptosis)调控中的核心功能,为靶向该通路的疾病治疗策略提供了关键理论依据和潜在靶点。
大肠杆菌(E. coli)菌株DH5α用于质粒组装,BL21 Star (DE3)用于蛋白表达。4-O-甲基没食子酸(4-O-MGA)的喂养实验和de novo合成采用大肠杆菌BW25113(F′)。代谢途径构建使用高拷贝质粒pZE12和中拷贝质粒pCS27。蛋白表达采用pETduet-1载体。酶MxOMT的N端融合His标签。4-O-甲基转移酶(4-OMT)的质粒——
筛选具有增强GA 4-O-甲基转移酶活性的甲基转移酶**
为生物合成4-O-MGA,我们旨在鉴定一种优先催化没食子酸(GA)对位-O-甲基化(para-O-methylation)的4-OMT。既往研究表明,来自R. serpentina的RsOMT和来自M. tuberculosis的MtOMT具备该活性,但其催化效率极低(kcat?0.01?s?1)。为寻找更高效的GA 4-OMT,我们回顾文献后发现,来自Cyanobacterium Synechocystis sp.PCC 6803的CsOMT和来自M. xanthus的MxOMT——
本研究鉴定出一种高效GA 4-OMT,可催化GA的对位-O-甲基化,并通过半理性蛋白质工程成功提升其催化效率。结果表明,来自Myxococcus xanthus的MxOMT表现出最高的4-O-MGA生成活性,产量达68.86?mg/L,显著高于其他候选酶(如RsOMT、MtOMT和CsOMT)。这些酶虽也具对位-O-甲基化活性,但——
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