一种快速、低成本的肉汤浊度检测方法的评估：用于检测犬猫中氨苄西林耐药的下尿路感染

《Journal of Veterinary Internal Medicine》：Evaluation of a Rapid, Low-Cost Broth Turbidity Test for Detecting Ampicillin-Resistant Lower Urinary Tract Infections in Dogs and Cats

检测犬猫氨苄西林耐药性 broth turbidity试验的研究显示其高特异性（100%）和敏感性（89.47%），适用于资源有限环境快速筛查耐药性，但需注意低菌载和近期抗生素治疗可能影响结果。

　　尿路感染（UTI）在犬和猫中是一种常见疾病，通常需要及时的抗菌治疗以防止并发症，如肾盂肾炎或反复感染。然而，传统的微生物培养和药敏试验耗时较长，通常需要48到72小时，且成本较高，这在资源有限的环境中可能成为一大障碍。为了应对这一挑战，研究者开发了一种新型的低成本液体浊度检测方法，旨在快速检测犬猫尿路感染中对氨苄西林耐药的病原体。该方法具有简便、经济的特点，可能成为兽医临床实践中用于指导一线治疗决策的有力工具。

### 研究背景与目的

氨苄西林是一种常用的抗生素，尤其在治疗简单的尿路感染方面表现出良好的效果。它能够迅速在尿液中达到高浓度，从而降低对克拉维酸的需求。然而，随着对氨苄西林耐药菌株的增加，尤其是甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（*Staphylococcus pseudintermedius*）和扩展谱β-内酰胺酶（ESBL）产生菌（如肠杆菌科细菌），经验性治疗变得复杂，导致治疗失败和对二线抗生素的依赖。传统的微生物培养和药敏试验虽然被认为是金标准，但其耗时性和高昂费用限制了其在实际临床中的广泛应用。

因此，本研究旨在评估一种新型的快速、低成本的液体浊度检测方法，用于检测犬猫尿路感染中对氨苄西林耐药的病原体。该方法能够在16到24小时内提供结果，为兽医提供一种实用的点对点诊断工具，从而帮助他们做出更及时和有效的治疗决策。

### 研究方法与设计

本研究共收集了160份来自145只犬和15只猫的尿液样本，这些样本是从密西西比州立大学兽医学院（MSU-CVM）的诊断实验室中获取的，用于常规的抗菌谱分析（AST）。样本通过膀胱穿刺法采集，并在实验过程中与传统的微生物培养和药敏试验并行进行。所有样本均经过匿名化处理，以确保研究的客观性和科学性。

为了确保研究的严谨性，本研究遵循了诊断准确性研究的STARD指南。该指南要求研究设计、样本选择和结果分析必须透明和全面，以确保数据的可重复性和可靠性。在实验过程中，样本被分为两组：一组用于传统的微生物培养和药敏试验，另一组用于新型的液体浊度检测。传统的药敏试验采用Sensititre MIC板进行，而新型检测方法则利用含有氨苄西林的Mueller-Hinton（MH）培养基，通过观察培养基的浊度变化来判断是否存在氨苄西林耐药的病原体。

在实验设计中，研究者选择了2.5毫升的无菌MH培养基，并加入两个10微克的氨苄西林药敏片。随后，使用20微升的尿液样本进行接种，确保足够的细菌量以产生可观察的浊度变化。接种后的样本在37°C的非摇动培养箱中培养16到24小时，之后由两名独立且盲法评估的观察者进行评估。如果培养基出现明显的浊度变化，则视为阳性结果，表示存在氨苄西林耐药的病原体；如果无浊度变化，则视为阴性结果。

为了提高检测的准确性和可重复性，研究者还采用了一些标准化的评估方法。例如，通过使用标准的McFarland浊度参考管进行比较，以减少主观判断带来的误差。此外，研究者还考虑了样本的细菌浓度和最近的抗生素使用情况，以确保结果的可靠性。

### 研究结果

实验结果显示，新型的液体浊度检测方法在检测氨苄西林耐药病原体方面表现出较高的特异性（100%）和敏感性（89.47%）。特异性指的是该方法在没有耐药病原体的情况下正确判断为阴性的能力，而敏感性则指该方法在存在耐药病原体的情况下正确判断为阳性的能力。这两个指标均显示该方法在实际应用中具有较高的可靠性。

值得注意的是，所有36份由传统方法检测为对氨苄西林敏感的样本，在液体浊度检测中均被正确判断为阴性，即不存在耐药病原体。这进一步验证了该方法的高特异性，表明其在判断耐药性方面具有较高的准确性。然而，研究者也发现存在两个假阴性结果，这些样本的细菌浓度较低（≤1000 CFUs/mL），可能是导致检测失败的原因之一。

此外，研究还发现，某些样本的检测结果与传统方法不一致，这可能与样本中同时存在对氨苄西林敏感和耐药的病原体有关。例如，一份样本中同时含有对氨苄西林敏感的*Staphylococcus pseudintermedius*和对氨苄西林耐药的*Proteus* spp.，但由于尿液中含有较高浓度的抗生素（如头孢维菌素），导致耐药菌株在检测过程中未能生长，从而产生假阴性结果。这提示我们在使用该方法时，需要充分考虑患者的近期抗生素使用情况，以避免因残留药物影响检测结果。

### 讨论与意义

本研究的结果表明，氨苄西林液体浊度检测方法在检测犬猫尿路感染中对氨苄西林耐药的病原体方面具有显著的临床价值。该方法不仅能够提供快速的检测结果，还能显著降低检测成本，使其在资源有限的环境中更具可行性。传统的微生物培养和药敏试验通常需要48到72小时，并且费用较高，可能超出许多兽医诊所的预算。相比之下，新型的检测方法能够在16到24小时内完成，且每份样本的检测成本远低于传统方法，这对于提高诊断效率和促进抗菌药物的合理使用具有重要意义。

然而，该方法也存在一些局限性。首先，其敏感性略低于特异性，这主要是由于样本中细菌浓度较低或近期抗生素使用的影响。因此，在使用该方法时，需要确保样本中的细菌浓度足够高，并且排除近期使用抗生素的患者。其次，该方法仅用于检测氨苄西林耐药性，而无法提供病原体的种类和对其他抗生素的耐药性信息，这意味着在获得阳性结果后，仍需进行传统的微生物培养和药敏试验以进一步确认病原体的特性。

此外，研究者还提到，该方法在实际应用中需要进一步优化。例如，可以考虑增加接种的尿液体积，以提高对低浓度样本的检测能力。同时，使用更先进的仪器（如微生物密度计）来替代人工判断，有助于提高检测的客观性和准确性。此外，考虑到不同地区可能存在不同的耐药模式，该方法的推广可能需要在更多样化的样本中进行验证，以确保其在不同环境下的适用性。

### 临床应用建议

基于本研究的结果，氨苄西林液体浊度检测方法可以作为兽医临床实践中的一种辅助工具，特别是在需要快速诊断和治疗决策的情况下。该方法能够帮助兽医判断是否需要进一步进行传统培养和药敏试验，从而避免不必要的抗生素升级。对于那些临床怀疑尿路感染但细菌浓度较低的患者，该方法可能无法提供准确的结果，因此需要结合其他临床信息进行综合判断。

在实际应用中，兽医应优先考虑使用该方法进行对氨苄西林耐药性的初步筛查，特别是在资源有限的环境中。如果检测结果为阴性，表明患者可能感染了对氨苄西林敏感的病原体，此时可以安全地使用指南推荐的一线抗生素（如阿莫西林）。如果检测结果为阳性，则提示可能需要进一步进行传统培养和药敏试验，以确认耐药性并选择更合适的治疗方案。

此外，该方法的高特异性使其在判断对氨苄西林敏感的病原体方面具有较高的可靠性，从而减少了因误判而导致的不必要的治疗升级。这对于抗菌药物的合理使用和减少耐药性的传播具有重要意义。

### 研究的局限性

尽管本研究展示了氨苄西林液体浊度检测方法在检测尿路感染中对氨苄西林耐药性方面的潜力，但该方法仍存在一些局限性。首先，样本中氨苄西林耐药病原体的低发生率（19份阳性样本）导致敏感性估计的置信区间较宽（66.86%–98.72%），这可能影响其在实际应用中的精确性。因此，未来的研究可能需要使用更大的样本量或更高发生率的耐药病原体，以获得更精确的敏感性数据。

其次，该方法的检测结果依赖于人工观察，这可能引入一定的主观性。为了提高检测的客观性，未来可以考虑引入更标准化的评估工具，如微生物密度计或标准的浊度参考管，以减少人为判断的误差。

此外，该方法的临床价值还受到样本中细菌浓度和近期抗生素使用的影响。因此，在使用该方法时，兽医需要结合患者的临床病史，尤其是近期是否使用过抗生素，以确保检测结果的准确性。对于那些近期使用过抗生素的患者，可能需要采用其他检测方法或延迟使用该方法，以避免残留药物对检测结果的干扰。

### 结论

本研究的结果表明，氨苄西林液体浊度检测方法在检测犬猫尿路感染中对氨苄西林耐药的病原体方面具有较高的特异性和敏感性，是一种快速、低成本的诊断工具。该方法能够帮助兽医在短时间内做出治疗决策，从而提高患者的治疗效果并促进抗菌药物的合理使用。然而，其在低细菌浓度或近期抗生素使用情况下的表现可能受到一定影响，因此在临床应用中需要谨慎考虑这些因素。

总体而言，该方法为兽医提供了一种可行的替代方案，特别是在资源有限的环境中。通过结合临床信息和检测结果，兽医可以更有效地管理尿路感染，减少不必要的抗生素使用，从而降低耐药性的风险。未来的研究应进一步优化该方法，以提高其在各种临床情况下的适用性和准确性，使其成为一种更全面的诊断工具。