亚甲蓝（美蓝）对罗氏Cobas分析仪检测项目潜在干扰的临床案例研究与评估

《Clinical Chemistry》：A-117 An intriguing case of the green plasma

本刊编辑推荐：针对临床检验中罕见的绿色血浆样本，研究人员开展了一项关于亚甲蓝（术中染色剂）对罗氏Cobas分析仪上多种检测方法（包括电化学发光法如Elecsys Troponin T hs，以及分光光度法如CK、Glucose HK、Iron、Calcium、Magnesium等）潜在干扰的研究。通过审查试剂说明书、文献及分析反应监测曲线，发现亚甲蓝虽未在说明书中列为干扰物，且分析过程无报警，但可引起部分项目基线信号变化，不过反应曲线轮廓与对照一致。研究表明亚甲蓝干扰轻微，结果为类似临床案例提供了重要参考依据。

　　

在临床检验实验室的日常工作中，偶尔会遇到一些外观异常的样本，它们独特的颜色常常让检验医师心头一紧。这些异常颜色可能预示着潜在的检测干扰，直接关系到检验结果的准确性和临床决策的正确性。其中，绿色的血浆样本尤为罕见，当其出现在实验室时，往往会引发一系列关于检测结果可靠性的疑问。近期，《Clinical Chemistry》杂志报道了一例因使用亚甲蓝（Methylene Blue）而导致血浆变绿的临床案例，这为研究特定药物对常规生化与免疫检测的干扰提供了宝贵机会。

亚甲蓝是一种多用途的药物，在临床上常用于治疗高铁血红蛋白血症（Methemoglobinemia），同时也作为手术染料在肿瘤手术中广泛应用，例如在乳腺癌手术中用于前哨淋巴结绘图（Sentinel Node Mapping），以帮助外科医生精准定位淋巴结。然而，这种染料具有独特的光学特性，其在可见光区的峰值吸收波长分别为613纳米和664纳米，在紫外区也有一个292纳米的吸收峰。更值得注意的是，亚甲蓝在体内可通过高铁血红蛋白还原酶（Methemoglobin Reductase）的作用被还原为无色亚甲蓝（Leucomethylene Blue），这一过程涉及NADPH的氧化，可能对依赖NADPH的生化反应产生化学干扰。尽管亚甲蓝应用广泛，但关于其对现代自动化分析平台检测干扰的系统研究却十分有限，试剂说明书中也往往未将其列为潜在干扰物质。因此，当一位乳腺癌患者的绿色血浆样本被送至实验室进行化学检测时，研究人员决定深入探究亚甲蓝对常用检测项目的潜在影响。

为了全面评估亚甲蓝的干扰效应，研究团队采用了多种技术方法。研究主要分为两部分：文件审查和反应监测曲线分析。检测在罗氏Cobas分析平台上进行，重点关注了两种不同的检测原理——电化学发光法（Electrochemiluminescence）和分光光度法（Spectrophotometry）。具体而言，研究涉及了Cobas? e801模块上的Elecsys高敏肌钙蛋白T（Troponin T hs）检测，这是一种异相夹心法电化学发光免疫分析；以及Cobas? c702模块上的肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）检测，这是一种基于酶动力学的分光光度法检测。此外，还研究了葡萄糖HK法（Glucose HK Gen.3，检测NADPH在340 nm的吸光度）、铁（Iron Gen.2，检测Fe²⁺与FerroZine络合物在570 nm的吸光度）、钙（Calcium Gen.2，检测Ca²⁺与5-硝基-5'-甲基-BAPTA络合物在340 nm的吸光度）和镁（Magnesium Gen.2，检测Mg²⁺与二甲苯蓝络合物在600 nm的吸光度）等检测项目。研究通过比较患者样本与质控品（QC）及其他患者样本的检测结果和反应过程曲线来评估干扰。

研究结果

文件与文献回顾

研究人员首先回顾了相关检测项目的试剂说明书（Package Insert）和现有科学文献。结果显示，在所检测项目的说明书中，均未将亚甲蓝列为已知的潜在干扰物质。同时，文献中也缺乏关于亚甲蓝对这些特定检测项目产生干扰的明确报道。这凸显了当前知识的空白，以及进行此项案例研究的重要性。

分析仪器的反应

在技术层面，当含有亚甲蓝的绿色血浆样本在Cobas分析仪的e801和c702模块上运行时，分析仪并未触发任何报警或显示错误信息，例如吸光度异常等。这表明仪器系统本身并未识别出明显的检测异常。对于Elecsys Troponin T hs检测，由于其检测方法的设计，未能获得反应监测曲线（Reaction Monitor Curves）进行进一步分析。

反应监测曲线分析

对分光光度法检测项目的反应曲线进行详细比对后发现，尽管基线信号存在一些差异，但反应的整体动力学轮廓在患者样本和对照样本之间是一致的。

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  对于肌酸激酶（CK）检测，患者样本的基线信号低于对照样本。然而，在基线期和加入第二试剂后，患者样本的反应曲线轮廓与对照样本相同。CK检测是一个两步过程：首先加入己糖激酶（Hexokinase）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）、ADP和NADP⁺，与内源性物质反应产生基线吸光度；然后加入过量的底物启动CK反应。
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  对于葡萄糖（Glucose HK）和钙（Calcium）检测，患者样本的基线信号略低于对照。
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  对于铁（Iron）和镁（Magnesium）检测，患者样本的基线信号则高于对照。
  关键发现在于，所有上述检测中，患者样本与对照样本的反应进程曲线（Reaction Profile）形状是相同的，提示亚甲蓝可能主要影响反应的初始基线吸光度，但并未显著改变酶促反应或化学反应的动力学过程。

结论与讨论

本研究通过综合评估试剂说明书、文献综述以及详细的分析物反应曲线分析，得出结论：在所述案例中，亚甲蓝对罗氏Cobas分析仪上进行的Elecsys Troponin T hs、肌酸激酶、葡萄糖、铁、钙和镁等检测项目造成的干扰极小。尽管观察到部分项目基线吸光度的变化，但由于反应曲线轮廓保持一致，表明检测的核心化学反应未受实质性影响。

这一发现具有重要的临床意义。它首次较为系统地评估了术中使用的亚甲蓝染料对一系列常用临床生化及免疫检测项目的潜在影响，为临床医生和检验人员在遇到类似情况时提供了参考依据，有助于减轻其对异常颜色样本结果可靠性的过度担忧。然而，研究者也谨慎地指出，由于本研究是一项基于临床样本的案例报告，并未进行正式的加标实验（Formal Spiking Study）来绝对确认无干扰存在，因此在发布检测报告时，对结果进行了附加说明（Appended），以提示临床注意。

该研究强调了在临床检验工作中，对于药物干扰的认识需要不断更新。即使某些物质未在试剂说明书中列为干扰物，也可能通过光谱干扰（由于染料在特定波长有吸收）或化学干扰（如影响辅因子NADPH）的途径影响检测。未来有必要开展更受控的实验研究，以精确量化亚甲蓝在不同浓度下对各种检测方法的干扰程度。总之，这项研究增进了我们对特殊临床情况下检测干扰的理解，体现了检验医学与临床实践紧密结合的重要性，最终服务于患者的安全和精准诊疗。