CHO-K1平台高效生产PRV gB/gD亚单位疫苗及其对变异伪狂犬病毒的临床保护评估

本研究通过CHO-K1细胞平台成功实现伪狂犬病毒（PRV）gB-N+IV和gD抗原的高效表达（产量分别达1.12 g/L和2.0 g/L），并开发出符合DIVA监测需求的亚单位疫苗。该疫苗在攻毒实验中展现出与商业疫苗相当的临床保护效果，显著降低猪只发病率和死亡率，且具备良好的安全性及生产工艺可行性。

　　

Highlight

本研究亮点在于采用CHO-K1平台高效表达伪狂犬病毒（PRV）gB与gD抗原，突破传统亚单位疫苗产量瓶颈，并证实其对当前流行变异株的临床保护效力，为猪伪狂犬病防控提供安全可控的新型疫苗解决方案。

Materials and methods

实验所用母猪和仔猪由哈尔滨疫苗科学生物技术有限公司提供，所有操作均在无特定病原体（SPF）条件下进行，并遵循动物伦理委员会（IACUC）批准方案（PIVP24–007-01）。PRV JK毒株由同一公司分离鉴定并保存。CHO-K1细胞系购自美国典型培养物保藏中心（ATCC），通过密码子优化和载体构建实现gB-N+IV与gD的重组表达。

Expression optimization and yield

重组gB-N+IV和gD蛋白在CHO-K1细胞中经优化分批培养实现高效生产：gB使用BM03培养基，gD使用BM05培养基，自第3日起每日添加FM01和Feed B补充剂（添加量分别为初始培养体积的3%和0.3%）。生物反应器参数控制在37°C、pH 7.0–7.2、溶氧30%，通过亲和层析和分子筛纯化后抗原纯度超95%，最终gB-N+IV产量达1.12 g/L，gD达2.0 g/L。

Discussion

本研究证明CHO-K1表达的gB/gD亚单位疫苗能实现高产稳定的抗原生产，并在猪体内提供强效的PRV攻毒保护。其抗原产量显著优于既往报道，且纯化工艺满足兽用生物制品规模化生产需求。疫苗配伍Montanide ISA 201 VG或氢氧化铝佐剂后，能有效诱导中和抗体并降低临床评分，同时具备与gE缺失毒株鉴别诊断（DIVA）的兼容性，为田间净化计划提供关键技术支撑。

CRediT authorship contribution statement

Chengkai Yin： 原创撰写、课题设计、方法实施与数据整理；

Dan Yu： 审校修订与实验监督；

Tianyan Liu： 审校修订；

Hongna Chen： 数据可视化与验证；

Jiarui Yang： 审校修订；

Zhihang Liu： 审校修订与实验监督。

Declaration of competing interest

作者声明不存在可能影响本研究结果的已知竞争性经济利益或个人关系。所有作者均任职于江苏康缘药业研究院，本研究由江苏康缘药业内部研发资金支持，未涉及外部机构或第三方资金。

Acknowledgment

作者感谢丁国杰博士（Dr. Guojie Ding）在试验过程中提供的技术支持。