猪链球菌脑膜炎治疗前后唾液免疫与应激生物标志物的动态变化及临床监测价值研究

本研究针对猪链球菌脑膜炎治疗监测难题，开发了基于AlphaLISA技术的唾液CRP和Hp检测新方法，证实唾液生物标志物（CRP、Hp、ADA、Calprotectin、TP、sAA）可有效评估治疗效果，为无创化动物健康监测提供重要工具。

　　

猪链球菌（Streptococcus suis）感染是养猪业中导致脑膜炎、关节炎和肺炎的重要病原体，不仅造成经济损失，还是一种人畜共患病，对公共卫生构成威胁。当前养殖业面临抗生素滥用、动物应激管理困难以及缺乏高效治疗监测手段等问题。传统的血液检测虽能反映疾病状态，但采样过程对猪只应激大，且不适合频繁现场监测。唾液作为一种非侵入性样本，近年来在兽医领域展现出巨大潜力，但其在治疗监测中的应用尚未系统探索。

为此，来自西班牙穆尔西亚大学临床分析交叉学科实验室（Interlab-UMU）的研究团队开展了一项创新研究，旨在通过唾液生物标志物动态变化评估猪链球菌脑膜炎的治疗效果，并开发高灵敏度检测方法。该研究近期发表于《The Veterinary Journal》，为无创化动物健康管理提供了重要科学依据。

研究团队采用AlphaLISA技术新开发了唾液C反应蛋白（CRP）和结合珠蛋白（Hp）的定量方法，同时对腺苷脱氨酶（ADA）、钙卫蛋白（Calprotectin）、总蛋白（TP）和α-淀粉酶（sAA）等已知标志物进行监测。研究纳入28头出现脑膜炎症状的7-8周龄猪只，在治疗前（D0）、治疗后3天（D3）和7天（D7）采集唾液样本，根据治疗反应分为康复组（Group A）和未康复组（Group B）。

关键技术方法包括：基于AlphaLISA的CRP和Hp检测技术（免洗、低样本量）、自动化生化分析仪（Olympus AU 400）测定ADA、Calprotectin、TP和sAA，并使用商业试剂盒进行验证；样本来自西班牙南部商业养殖场具有自然感染背景的猪群；统计采用重复测量方差分析（GLM）、弗里德曼检验及邓恩事后检验，相关性分析使用斯皮尔曼检验。

3.1. CRP和Hp检测方法的分析验证

新建立的AlphaLISA方法显示良好的分析性能：CRP和Hp的检测限分别为0.32 μg/L和1.37 μg/L，功能灵敏度为0.86 μg/L和1.67 μg/L； intra-和inter-assay变异系数均<12%，稀释线性R2>0.99，回收率接近100%，符合临床检测要求。

3.2. 治疗后的生物标志物变化

在康复组中，所有标志物在D7时均显著下降（p<0.05）。其中CRP和sAA在D3即出现早期下降（p<0.05和p<0.01），提示它们可作为治疗响应的早期指标。未康复组则无显著变化。具体来看：

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  CRP：康复组D3和D7较D0显著降低（p=0.011和p<0.001）
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  sAA：康复组D3和D7活性显著下降（p<0.001）
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  Hp、ADA、Calprotectin和TP：均在D7时出现显著下降（p<0.05）

3.3. 相关性分析

CRP与Hp呈高度正相关（r=0.73, p<0.001），与Calprotectin、TP呈中度相关；Hp与Calprotectin和TP也高度相关（r=0.67–0.70），表明这些炎症相关标志物在病理过程中具有协同变化规律。

研究结论强调，唾液生物标志物可有效监测猪链球菌感染的治疗响应，其中CRP和sAA的早期下降尤为关键，提示炎症控制和应激缓解。新开发的AlphaLISA方法具有高灵敏度、免洗、样本量少等优势，适合现场应用。该研究不仅推进了兽医无创诊断技术的发展，还为减少抗生素滥用、实现精准治疗提供了实践依据，对提升动物福利和公共卫生安全具有重要意义。