罗非鱼湖病毒（TiLV）结构蛋白的鉴定及其在病毒组装与亚单位疫苗开发中的关键作用

本文推荐：该研究首次通过蔗糖梯度超速离心结合SDS-PAGE和LC-MS/MS技术，系统性鉴定了 Tilapia lake virus (TiLV) 病毒粒子的结构蛋白组成。研究发现核蛋白(NP)（由片段4编码）是病毒最主要的38 kDa结构成分，同时鉴定了片段6编码的~40 kDa蛋白。该成果为理解TiLV病毒粒子架构、开发精准诊断技术（如ELISA）和亚单位疫苗提供了直接生化证据，对防控全球罗非鱼养殖业重大病原体具有重要意义。

　　

Highlight

细胞系和病毒增殖

TiLV在源自纹鳢（Channa striata）的E-11细胞系中进行增殖。这些细胞购自欧洲认证细胞培养物保藏中心（ECACC）（目录编号01110916，批次16B042，英国），采用Leibovitz‘s L-15培养基（L-15；Gibco? Life Technologies）进行培养，培养基中添加了5%胎牛血清（FBS；Gibco?）和1%抗生素-抗真菌溶液（Gibco?）。

TiLV在E-11细胞中的增殖与确认

通过观察细胞病变效应（CPE）确认了TiLV在E-11细胞中的感染，CPE在接种后5-7天变得明显，包括细胞质空泡化和斑块形成（图1）。模拟感染的对照组中未观察到CPE（图1）。针对TiLV片段3的半定量RT-PCR在感染细胞的培养上清和细胞RNA中均得到了预期的250 bp扩增片段（图2，泳道1和2），与阳性对照结果一致（图2，泳道5）。在模拟感染的样本中未检测到扩增。

讨论

TiLV仍然是全球罗非鱼养殖业的重大挑战，其分子组成知识的缺乏持续阻碍着有效控制措施的开发（Jansen et al., 2018; Surachetpong et al., 2020）。特别是，TiLV病毒粒子的结构蛋白在很大程度上仍未得到表征，因为许多预测的开放阅读框（ORF）与已知的病毒蛋白缺乏相似性。本研究首次直接表征了TiLV病毒粒子的蛋白质组成，通过实验验证了生物信息学预测，并为理解病毒组装机制提供了见解。