高通量筛选老药新用治疗犬淋巴恶性肿瘤的探索性研究：发现五种候选药物及其体外活性评估

本研究针对犬淋巴恶性肿瘤现有化疗方案局限性的临床难题，通过高通量筛选技术系统性评估了1824种已批准药物在三种犬淋巴肿瘤细胞系（GL-1、UL-1、CLBL-1）中的抗增殖活性。研究发现45种具有肿瘤选择性的化合物，并进一步筛选出五种（青蒿琥酯、氯硝柳胺、喷他脒、伊曲康唑和决奈达隆）在体外展现剂量依赖性抑制效应，其半数抑制浓度（IC50）与犬体内最大血浆浓度（Cmax）相当或更低，为老药新用治疗犬淋巴瘤提供了有前景的候选药物和理论基础。

　　

犬淋巴恶性肿瘤是临床上最常见的造血系统肿瘤之一，尽管CHOP化疗方案能够使绝大多数患犬达到初期缓解，但复发率高、耐药性强以及骨髓抑制和胃肠道反应等副作用，限制了其长期疗效。近年来，尽管有新药如rabacfosadine和verdinexor投入应用，但其疗效并未显著超越CHOP方案，犬淋巴瘤的治疗仍面临巨大挑战。开发全新抗癌药物不仅周期长、成本高，而且失败风险大。在这一背景下，“老药新用”（drug repositioning）成为一种极具吸引力的策略——利用已有临床药物发掘其抗癌新用途，可大幅降低研发时间和成本。

为此，研究人员在《BMC Veterinary Research》上发表了一项探索性研究，他们采用高通量筛选（high-throughput screening, HTS）技术，系统性地测试了1824种已批准药物对三种犬淋巴瘤细胞系（B细胞急性淋巴细胞白血病GL-1、T细胞淋巴瘤UL-1、B细胞淋巴瘤CLBL-1）以及非肿瘤性MDCK细胞的抗增殖作用，旨在发现具有选择性抑制潜力、且药代动力学特性适用于犬类的老药品种。

本研究主要采用了以下关键技术方法：使用水溶性四氮唑（WST）法进行细胞毒性检测；利用384孔板和声波移液系统实现高通量化合物处理；通过剂量反应实验计算半数抑制浓度（IC₅₀）；并基于文献检索评估候选药物的药代动力学参数（如C_max）与临床前证据。所有细胞系均经支原体污染检测确认为阴性。

Primary screening：

研究人员在5μM浓度下对1824种化合物进行初步筛选，发现共有293种化合物至少对一种淋巴瘤细胞系抑制率超过50%。经复测验证后，45种化合物在所有三种肿瘤细胞中抑制率均超过90%，而在非肿瘤MDCK细胞中则低于90%，显示出良好的肿瘤选择性。常见抗癌药如多柔比星也显示出强抑制活性，印证了筛选系统的可靠性。

Literature review of candidate compounds：

通过文献综述排除抗肿瘤药、局部用药及免疫抑制剂后，最终锁定16种化合物。进一步筛选出5种既具备犬药代动力学数据（C_max）又有临床使用或药效学证据的药物：青蒿琥酯（artesunate）、氯硝柳胺（niclosamide）、喷他脒（pentamidine）、伊曲康唑（itraconazole）和决奈达隆（dronedarone）。这些药物多属抗寄生虫、抗真菌或抗心律失常类，符合“老药新用”策略。

Secondary screening：

对这5种候选药物进行剂量反应实验，结果显示它们均能剂量依赖性地抑制三种淋巴瘤细胞系的增殖。其中，青蒿琥酯的IC₅₀值最低（0.22–0.54 μM），且其C_max（9.27 μM）远高于起效浓度；喷他脒的IC₅₀（0.71–0.95 μM）也低于其在犬中的C_max（2.6 μM）。决奈达隆在UL-1细胞中IC₅₀低于C_max，而伊曲康唑与氯硝柳胺的IC₅₀均高于C_max，提示可能需要更高剂量或联合用药策略。

研究表明，青蒿琥酯、喷他脒等药物不仅体外活性显著，且已有的安全性和药代动力学数据支持其进一步开发用于犬淋巴瘤临床治疗。尽管如此，氯硝柳胺和伊曲康唑由于蛋白结合率高或CYP3A4抑制潜力，其临床转化需更多研究支持。此外，研究也指出当前筛选模型的局限性，如未使用正常淋巴细胞作为对照，以及单浓度初筛可能遗漏部分低效价化合物。

该研究成功挖掘出多个具有抗犬淋巴瘤潜力的老药品种，为改善当前化疗方案提供了新思路。这些药物若能在后续体内实验和临床研究中验证其疗效，将极大推动犬肿瘤治疗的发展，并为“老药新用”这一策略在兽医肿瘤学中的应用树立重要范例。