小鼠骨性半规管形态个体发育研究：揭示早期形态可塑性窗口与骨化约束机制

本文通过高分辨率显微CT成像与几何形态测量学分析，系统揭示了小鼠出生后骨性半规管形态发育的动态过程。研究发现，半规管在出生后第一周经历快速生长与形态转变，其形态成熟与周围耳囊骨化进程紧密耦合。骨化启动（P1-P7）后形态变异显著降低，表明骨化过程对半规管形态施加了渐进式约束。该研究为理解哺乳动物前庭系统发育关键期及化石个体发育解读提供了重要实证依据。

　　

1 INTRODUCTION

从个体发育视角看，半规管形态具有显著的早熟特性。人类半规管在子宫内妊娠中期即达到成人尺寸，与骨迷路的骨化过程同步。其整体形态和横截面形状在出生后及成年期保持高度稳定，仅管壁有微小改变，这可能是成年后骨重塑解除抑制的结果。这种形态成熟的 prenatal 时间点尤其值得关注，因为它先于独立头部支撑和步态发育的开始，尽管前庭眼反射（VOR）可能在子宫内已有功能。

早期发育稳定性似乎与骨化时间紧密相关，这种关系可能超越人类范围并提供有价值的比较见解。许多哺乳动物的半规管骨化也在产前开始，但较小物种（包括许多啮齿类）出生时具有未骨化的迷路，小鼠的骨迷路在出生时未骨化，仅在出生后约8天开始骨化。这种骨化相对发育时间的异速缩放效应可能反映了稳定较大头骨生长所需的更大刚性。

比较证据支持半规管成熟与骨化开始之间的联系，但小鼠形态发育和骨化的时间模式数据仍然有限。关键未解问题是骨化是在成熟 canal 形态建立后启动，还是主动约束进一步形态发育。形状和大小变异模式可能帮助区分这些场景。如果变异在骨化前降至成人水平，表明骨化跟随形态成熟；反之，如果变异在骨化过程中持续下降且仅在完成后稳定，则骨化可能作为发育约束最终确定 canal 形态。

小鼠是研究个体发育的优秀模型，因其易得性、可获得统计稳健样本量、检查多个发育时间点的可行性，且是公认的人类内耳疾病模型。它们可在严格受控环境条件下维持，最小化对形态的外部影响，尽管迷路似乎特别抵抗环境因素。仅使用雄性标本进一步消除了性别二态性的潜在混淆效应。系统发育上，小鼠和其他啮齿类与灵长类和人同属胎盘哺乳动物的同一分支，真灵长总目，提供了人类发展的相关比较视角。

2 METHODS

2.1 Sample, imaging and segmentation

共43只雄性小鼠头骨（C57BL/6J WT Mus musculus）纳入研究。样本包括 postnatal days 1, 7, 14, 28, 48各6个标本，及26月龄13个标本。所有标本在处死后立即用磷酸缓冲福尔马林固定，并使用显微CT成像。初始扫描使用 SkyScan 1272 micro-CT scanner（Bruker Ltd）在50 kV和200 μA，0.25 mm铝滤片下进行。扫描确认1、7、14天龄小鼠岩骨骨化不完全，且X射线衰减不足以可靠划分1和7天龄小鼠的 canals。这些标本随后用碘化钾（I₂KI 9% w/v）染色以增加软组织结构对X射线的衰减，并重新扫描。验证后，对比增强扫描用于P1和P7组所有分析，而标准扫描用于所有其他年龄组。成像后，每个耳朵的数据集单独处理，共86个图像栈。

为进行几何形态测量和横截面分析，需要为每个半规管计算中心流线。该线从壶腹端延伸到 canal 加入前庭的点（外侧 canal）或总脚（前和后 canals）。每个骨迷路使用阈值法和手动分割技术结合进行分割。然后使用 Amira（Version 6.0.0, Thermo Fisher Scientific）中的 Distance-ordered thinner 和 Trace lines 模块通过骨架化过程生成中心线。所得线条经手动审查，使用 Smooth line 模块平滑（smooth: 0.9; attach to data: 0.05; number of iterations: 100），并手动修剪至适当解剖端点。每个 canal 计算一条中心线。

2.2 Geometric morphometric analysis

使用几何形态测量学（GMM）分析评估半规管形状，采用基于标志点的方法。共37个标志点—7个固定点和30个滑动半标志点—沿 canal 中心线放置。固定点使用 Amira 的 Landmark 模块手动设置，而滑动半标志点通过使用 Geomorph 包中的 digit.curves() 函数将中心线下采样至10个等距点生成。每个耳朵及其37个标志点集被视为单个分析单元，称为配置。所有 GMM 分析在 R 中使用 Geomorph 包（version 4.0.7）进行。

为评估观察者内重复性，从每组随机选择一个标本进行重复标志点放置。每个标本每个会话标志点放置一次，重复间最小间隔1天。共进行五次重复。所有重复完成后，标志点配置使用广义普氏叠加对齐，并通过主成分分析（PCA）可视化形态空间分布。进行普氏ANOVA，以个体和重复编号作为预测因子。结果用于计算组内相关系数，进而转换为重复性度量，标志点放置重复性为98.08%。

配置大小使用 centroid size 量化，定义为从每个标志点到配置质心的平方距离之和的平方根。组间均值使用ANOVA和配对t检验比较。PCA用于可视化形态空间的形状变异。为评估大小对形状的影响，进行了普氏ANOVA。该分析的残差添加到总体平均配置以生成无 allometry 配置。计算每个标本到总体均值和组均值的普氏距离，以分别评估组间和组内变异。这些距离表示对应普氏对齐标志点间平方差之和的平方根。

2.3 Canal cross-sections and lengths

Canal 中心线用于在 Amira 的 Slice 模块内定向垂直切片平面，使用概述的方案。所得横截面分割然后导入 ImageJ（v1.53a, NIH, USA），使用 Shape Descriptors 工具测量面积（像素）和纵横比。横截面积随后通过将像素计数乘以图像像素分辨率的平方以物理单位计算。纵横比计算为长轴/短轴。值为1表示圆形横截面，值增加反映更大伸长。Canal 长度通过求和每个中心线上连续点间的欧几里得距离计算。ANOVA和配对t检验用于比较所有六组的横截面积、纵横比和 canal 长度。

为标准化跨标本的横截面采样，无论长度如何，切片位置表示为 canal 长度的百分比，0%对应壶腹端，100%对应 canal 加入前庭（外侧 canal）或总脚（前和后 canals）的点。总脚本身被排除在分析之外。每个 canal 分为50个等间距箱，这提供了足够分辨率以捕获跨组的形态模式。为避免具有更高扫描分辨率标本（即每段更多切片）的偏差，每个段内的测量取平均，确保每个标本每箱贡献单个代表值。

2.4 Staining comparisons

为评估观察到的骨化和非骨化组间差异是否可归因于扫描期间的对比度增强，所有上述分析对P14组使用对比和非对比扫描重复进行。然后使用t检验比较结果以评估对比染色对测量的潜在影响。

3 RESULTS

3.1 Imaging validation

在几何形态测量分析中，对比增强（P14-c）和标准P14配置在所有主成分上重叠，表明无可归因于对比染色的形状差异。前六个主成分呈现。在对比和非对比数据集间，前、后或外侧 canal 长度无统计学显著差异。类似地，横截面积测量沿任何 canal 长度显示无显著差异，除前 canal 细长部分内的几个箱。相反，纵横比测量显示所有三个 canal 细长部分延伸区域存在统计学显著差异，最显著差异在外侧 canal。对比增强扫描表现出比非对比扫描更大的纵横比变异性。虚拟内铸体的视觉检查表明，这种增加的变异性可能是由于对比内铸体更粗糙或不均匀的表面纹理，而非对比扫描中观察到更光滑表面。

3.2 Ossification

在 postnatal day 1，未观察到立即围绕半规管的骨沉积，尽管岩颞骨其他区域有些骨化明显。到 day 7，薄骨层已形成，完全包裹所有三个 canals，包括总脚。值得注意的是，后和外侧 canals 细长部分间的边界尚未完全定义，在此阶段似乎共享共同管腔。到P14时间点，此骨层已增厚并增加密度，从 canals 离心模式进展直到 day 28（M1）。后续时间点（M2和M26）未观察到进一步变化。

3.3 Configuration shape analysis

前18个成分占样本总形状变异的95%。主成分1（PC1）单独解释64%的方差，而PC2占5%。沿PC1，P1组与所有其他组明显分离，后者 largely 重叠。为可视化沿PC1的形状变化，网格扭曲至最大（PC1 max; 0.178）和最小（PC1 min; -0.0429）PC1值。这些形状差异在前 canal 最明显，在PC1 max时呈现高度椭圆和扁平。在此配置中，最接近平均P1标本形状，前 canal 与总脚形成几乎直角。相反，PC1 min形状，更代表 older 组，显示更圆曲率。在后和外侧 canals 观察到类似模式，其中PC1 max形状显示更锐角。此外，面外偏差在PC1 min形状更突出，尤其在前 canal 上部分，更向内侧角度。沿任何剩余主成分未观察到组分离。

3.3.1 Procrustes distance

计算到总体样本均值的普氏距离，P1组显示最大距离，其次P7。ANOVA确认组间显著差异，配对t检验表明P1与所有其他组显著不同，而剩余组间无显著差异。还计算到每组均值的普氏距离，ANOVA显示显著差异。配对比较显示P1到组均值距离大于所有其他组，且P7与P14和M2相比略大。

3.3.2 Centroid size

ANOVA显示组间 centroid size 显著差异。配对t检验显示P1和P7组显著小于其他组。最 substantial 生长发生在P1和P7间，配置大小 nearly 加倍。P7和P14间观察到更小但仍统计显著增加（11%）。

3.3.3 Allometry

普氏ANOVA显示 allometry 是显著因素，占 total 形状变异的61.21%。年龄也是显著预测因子，尽管仅解释6.94%的变异。常见和组特定 allometry 模型间比较确认跨组共享 allometric 轨迹。校正 allometry 后，PCA显示所有组沿PC1重叠，解释14.33%的变异。沿PC2，P7组显得有些 distinct，尽管 substantial 重叠保留。沿PC2的形状变异主要与 canals 轻微缩短相关，无其他主要形状差异。尽管 allometric 校正，年龄仍是显著因素，解释15.84%的残差形状变异。

3.4 Canal length and cross-sections

3.4.1 Length

P1组在所有三个半规管中具有最短 canal 长度，其次P7组。ANOVA结果对所有 canals 统计显著。跨所有年龄组，前 canal 始终最长，其次后和外侧 canal。产后生长明显，所有三个 canals 在P1和P7间长度 nearly 加倍。P7和P14间观察到更小（~10%）但仍统计显著的长度增加，尤其在前 canal。检测到特定组间其他显著差异（如P14和M26在外侧 canal），尽管这些差异通常较小且不遵循一致发育模式。

3.4.2 Cross-section area

横截面积（CSA）沿所有三个 canals 几乎整个长度在组间显著不同，除后和外侧 canals 小区域外。最大差异在后 canal 观察到，尤其细长部分中点。此处，P1组具有最大CSA（~0.04 mm²），而P14和M26显示最小（~0.02 mm²）。此变异可能受早期阶段后和外侧 canals 共享管腔影响，因为差异向更远端区域减弱。在前 canal，无此类通信在任何时间点存在，CSA差异更小。最大CSA（P1）与最小（P7和M26）相差约0.007 mm²。剩余组间无显著差异。

总之，小鼠半规管产后发育以产后第一个月内快速骨化和形态变化为标志，此后无进一步结构改变。发现确认小鼠骨迷路在产后 days 1和7间被薄骨层包裹。此时期与 canal 长度和 centroid size 测量的最 substantial 生长及配置形状的最大变化一致。此后阶段，生长和形状变异 plateau，与所有三个 canals 完全被骨包裹的时间点对齐。普氏距离分析确认早期产后阶段 exhibit 最大变异，形状随时间 increasingly 稳定。骨性 canals 的横截面积跨组显示最小变异，表明它更早达到成熟。

4 DISCUSSION

4.1 Morphological maturation and functional implications

小鼠半规管 substantial 生长发生在第一产后周（P1–P7），由个体 canal 长度增加证明。在P1，前 canal 最长，其次后和外侧 canals；此模式与大多数其他哺乳动物一致。P7和P14间，进一步统计显著但更小的 canal 长度增加在所有三个 canals 观察到。值得注意的是，此二次生长发生在 canals 已被薄骨层包裹后，表明微小形态 refinements 可能持续 past 骨化开始。此后点，随着骨层增厚，未检测到 canal 长度的额外变化。Canals 间的相对比例在整个发育中保持稳定，前 canal 始终最长，外侧最短。这些发现得到几何形态测量分析支持。尽管 centroid size 反映整体配置且不隔离个体 canal 生长，centroid size 增加显示类似模式：centroid size 最大增加发生在P1和P7间，其次更小但显著增加在P7和P14间。因此，我们拒绝无差异的零假设在周围岩骨骨化前后小鼠 canal 大小变异。

不像 canal 长度，centroid size 受不仅大小而且形状特征影响。诸如平面度或椭圆度等度量变化可影响标志点定位、质心位置及随后 centroid size。传统上，半规管大小使用曲率半径评估。然而，本研究证明 canal 中心线长度与曲率半径紧密相关，前 canal 始终最长，其次后和外侧 canals—镜像先前报告的小鼠曲率半径模式。因此，通常基于曲率半径的功能推断可用此处发现进行。Canal 大小在种间和种内比较中与前庭敏感性正相关。具有更大敏捷性的物种具有相对 larger canals，可能导致增强敏感性。因此，第一产后周期间 substantial canal 大小增加可能贡献小鼠前庭敏感性的快速上升。尽管小鼠在约第二产后周 initiate 运动，成熟运动模式直到约P23观察到，且步态 refinement 持续直到P30。虽然P7前小鼠运动的详细研究缺乏，大鼠的类比数据显示此时期从不动到 pivoting 运动的过渡（用前肢推离而骨盆仍在地面上），随后在P7和P14间开始行走。同时（P11和P15间），小鼠睁开眼睛，这驱动视觉皮层的神经元成熟。此发育窗口与本研究观察到的 canal 骨化和形状成熟时间紧密对齐，表明前庭发育、协调运动出现和视觉系统激活间的潜在功能链接。虽然早期 pivoting 运动可能需求最小前庭输入，canals 的 substantial 生长可能启用这些初始运动。随后向行走的过渡与睁眼和成熟 canal 形态的获得一致，潜在支持更 refined 运动控制的出现，这需要视觉稳定。

半规管的相对比例在整个产后发育中保持稳定。前 canal 始终最长，其次后和外侧。研究显示小鼠前 canal 比相对较小的外侧 canal 更敏感。此模式在许多哺乳动物物种一致，有些例外如犰狳和海狮。此外，此模式不仅在产后生命稳定，而且在早期胚胎发育期间。Canals 的发育开始于约E10–E11，前 canal 首先出现，其次后和外侧 canals。到E12，前 canal 完全形成，而后 canal 仅开始形成。在E13，所有三个 canals 可区分。这表明小鼠，像大多数哺乳动物，对头部俯仰方向（前后运动）运动更敏感，且对偏航（水平）方向运动最不敏感。

几何形态测量分析揭示P1组与所有后续年龄组间显著形状差异。尽管变化在所有三个半规管观察到，它们在前 canal 最 pronounced。在P1，canals 呈现明显椭圆形状，与 older 标本中更圆形流线对比。此模式沿第一主成分（PC1）捕获，其中P1组与PC1 maximum 紧密对齐，而剩余组聚集 near PC1 minimum。应注意用于说明沿PC1这些差异的可视化基于源自P14标本的内铸体网格，最接近总体样本平均形状的配置，可能略微夸大形状变异的 extremes。尽管如此，P1组的实际形状 closely resemble PC1 maximum 形状，除壶腹和 canal 细长部分间的角度外。比较P1组网格和PC1 max，显然PC1 max 描述比平均P1标本更锐角。

提议 cupula 的机械敏感性与 canal 流线包围面积与流线长度的比率相关。基于此原则，更椭圆 canal—同时保持相同周长—将降低敏感性，使更圆 canals 功能上有利。然而，在 squamates，增加椭圆度与颅空间约束链接，其中背腹压缩头骨 favor 椭圆 canals 以容纳更大 canal 长度。显然，小鼠成熟半规管是圆的，但此椭圆适应可能在早期发育相关，当岩骨尚未达到其成熟大小时。在小鼠，岩骨似乎不在第一产后周生长，此时期以 canal 最 significant 扩张为标志，尽管此观察基于未染色显微CT数据因此限于骨化组织。可能快速软骨生长确实发生在此时期，随后加速骨化一旦达到足够大小。软骨内骨化，如岩骨，由 Indian Hedgehog（Ihh）信号通路调节，在小鼠基枕骨中从E12到产后阶段活跃。基枕骨是否在此阶段后经历软骨生长不清楚，因为研究依赖显微CT成像测量产后生长。然而，Ihh 表达在耳囊中的持续时间仍然未知。在约P7，如本研究所示，半规管被薄骨层包围，因此骨化开始发生在P1和P7间的某个点并持续直到M1。这表明骨化仅在结构达到发育阈值后开始，而不是作为进一步生长的约束。为进一步评估是否如此，需要更多时间点的研究在这些两阶段间的个体发育年龄。

虽然增加椭圆度可能 favor 代替垂直扩张在小 ventro-dorsal 空间实例中，它不 appear 是哺乳动物的普遍趋势。研究显示在成年哺乳动物中头骨大小和 canal 椭圆度无相关性。然而，可能暂时椭圆度可能服务发育功能。或许在早期发育期间，哺乳动物暂时 exhibit 更椭圆 canal 形状以优先生长其他颅区域，如脑或 petrosal lobule of the parafloculus，并最终收敛向更圆哺乳动物形状。在此时期，canals 可继续延长，并因此增加敏感性，而无需求增加岩骨的背腹生长。或者，canals 的早期快速生长导致 canal 大小相对头骨大小的不匹配，并且 canals 返回到更圆形状一旦成熟比率实现。这与此处发现的小鼠 canals 模式一致。证明在鳄鱼中确实如此，其中前庭系统在整个生命中增加大小，并且这与头骨大小增加相关，具有负 allometry。他们提议脑壳背腹空间增加允许前庭系统在相同方向的类似增加。相反，小鼠头骨成熟， both 形状和大小方面，直到约60天产后才达到，远晚于 canal 成熟的获得。尽管在小鼠此类生长可能对 canal 方向有更大影响 than 椭圆度，本研究未发现 ipsilateral canals 间角度显著变化的证据，即使它们未直接测量。任何此类变异将已可检测即使 after 普氏叠加，它保留标志点配置的内部比例。尽管如此，可能性 remains 迷路可能作为整体单元在头骨内旋转 thereby 维持 ipsilateral between-canal 平面，因为此类旋转在叠加期间被移除。

观察到的形状变化主要归因于大小和面外偏差的差异。这些偏差在比较P1组与 later 发育阶段时特别 pronounced。特别地，前半规管显示显著变化：从P7 onward，上段（邻近总脚）向前内侧移动，而最前段（近壶腹）变得更侧向位置。相反，P1前 canal 更少弯曲，从上部分更侧向延伸并向壶腹遵循更平坦轨迹。与圆度增加一样，这些偏差可能通过扩展能够刺激内淋巴流动和引发前庭响应的平面范围来增强 canal 敏感性。在类似曲率半径的 canals 中，此类面外偏差也会增加流线长度，潜在贡献更大敏感性。然而，此处讨论的潜在敏感性增加主要 due 到响应平面更广范围，因为从这些平面度偏差产生的 canals 额外延长与先前讨论的 canals 延长相比最小。

产后功能适应似乎限于配置形状和大小。骨性 canals 的横截面积在所有发育时间点显得 largely 一致，仅少数小区域观察到微小差异。总体而言，模式表明面积保持稳定。在E14.5，骨性 canals 的横截面积显得比成人大小小得多，并且因此必须在此点和P0间达到成熟，先于整体 canal 形状的获得并发生在骨化开始围绕 canals 至少一周前。管横截面积减少增加粘性阻尼， thereby 扩展可检测频率带宽， favoring 更慢头部运动。给定骨横截面积的早期成熟，通过管腔面积变化的任何进一步功能优化可能最小，其他形态适应优先。然而，因为这些测量涉及骨性 canals 而不是更功能相关的膜性管，横截面积适应的可能性不能完全排除。在成年小鼠，膜性管具有类似横截面积和形状作为骨性管腔，所以这些适应发生的可能性 unlikely。然而，在其他物种—即人类—膜性管比骨性 canals 小得多。膜性和骨性 canals 生长轨迹间的关系可能不遵循线性关系，而是骨性管的横截面积可能以更快速率增加在 later 阶段以优先整体 canal 扩张并可能允许 canal 功能的更精细 refinement。

4.2 Imaging considerations and methodological insights

对比增强和非对比增强扫描的比较揭示对比剂的使用显著改变 canals 的分割表面，特别明显当测量纵横比时。对比增强图像中软组织的增强可见性可能导致骨膜被突出，使其与骨无法区分，并可能解释图2中观察到的纵横比的一些差异。相反，横截面积测量显得对成像技术较不敏感，尽管一些区域差异可能归因于这些方法学差异。值得注意的是，配置形状保持未受影响。这可能是因为配置形状基于 canal 中心线，通过骨架化过程计算，相对免疫微小表面变异，不像高度依赖表面定义的横截面形状度量。也可能P14观察到的增加骨化使这些标本更抵抗IKI诱导收缩与P1和P7相比。然后，P7和P14间明显（尽管小）生长将反映成像模态差异而不是真实生物学变化。然而，P7和P14组间横截面积无显著差异表明由于染色的任何收缩最小。碘基对比成像仍然有价值用于可视化非骨化 canals，并且基于中心线的几何形态测量证明足够稳健用于统计比较。然而，谨慎保证当解释表面依赖度量时，如那些涉及周长计算，因为骨膜组织的包含可能导致高估和不准确结果。

4.3 Shape variation and developmental constraints

有趣的是，P1组 exhibit 比与其他组更广的形状变异范围，这对应时间点 where 无骨沉积直接围绕半规管。由下一时间点，P7，canals 出现完全衬有骨，尽管只有非常薄层，并且在此点形状变异已减少。在M1，骨化已达到成熟水平，并且此处形状变异现在类似后续时间点。这些发现不完全反驳零假设。虽然它们支持骨化在 canals 达到发育阈值后开始的想法，一些变化能力 remains 随着骨化施加渐进增加约束在 canal 形式上，如逐渐减少形状变异反映。此模式与在其他哺乳动物中观察一致具有 varying 骨化时间线，如人类、负鼠和土豚。

值得注意的是，此处研究的配置形状在P7达到成人形态，但大小变化持续 past 此时间点。可能，增加骨化确实进一步约束形式，并且整体形状变化对此约束更敏感，而微小大小增加仍然可能 before 完全骨化获得。完全骨化停止进一步形状修改的想法得到此处看到的小鼠M1时间点支持，并与在其他物种的发现对齐。可能观察到的差异大小源于中心线修剪的不准确。然而，这些发现与 centroid size 增加的一致性提供一些保证对抗此可能性。也就是说，如先前 noted，因为标志点沿中心线放置，centroid size 固有地由中心线的整体长度主导。

4.4 Comparative and evolutionary perspectives

这些发现 suggest 在功能约束方面较不清楚。作为晚成动物，小鼠直到约产后 days 11–15才睁开眼睛并且仅开始协调运动 around day 14。因此，可能无立即需求 fully 骨化骨迷路在出生时。半规管完全骨化的时间与睁眼和成人 canal 形式的获得紧密对齐。尽管 canals 在此阶段形态成熟，VOR的开始不清楚。在21天，小鼠显示成熟补偿眼运动在光中，但不在黑暗中；此阶段前测量证明困难。小鼠前庭神经元在P30左右达到成熟，与P21不成熟VOR的发现一致。关于行为和前庭发育在小鼠中 interplay 的两种可能性出现：要么行为表达最初受约束直到外周前庭系统达到足够水平的形态成熟，要么早期功能线索主动塑造形式发育。基于此处呈现的数据，这些场景间的明确区分不能进行。然而，证据指向 likely 发育序列：在早期阶段，行为表达 largely 受前庭系统未发育形态限制，其生长主要由遗传机制指导迷路发育决定。随着结构成熟 advance 超越临界阈值，功能活动 increasingly 影响进一步 refinement，启用形式和功能的动态、互惠微调。此发育轨迹支持延长、分期和晚成产后生命时期。其他晚成哺乳动物，如 Ornythorincus、Echidna 和 Oryctolagus、Mesocricetus、Monodelphis 和 Macropus、以及 Canis，也开始骨化产后。此外，早成哺乳动物如几种反刍动物、猪和鲸类开始骨化产前。相反，人类，也认为是晚成，出生时具有 fully 发育和骨化半规管，并且此骨化不与运动开始相关，尽管它更接近VOR的开始。

类似地，颅骨骨化早期开始已在慢速生长物种中观察到，并且可能是妊娠时间的函数。在颅区域中，颅底出现 exhibit 骨化时间跨物种最大变异性。慢速生长物种也倾向更大，因为妊娠长度与出生体重和，更强烈地，与出生脑质量相关。因此，具有更长妊娠期和更大新生儿脑质量的物种更可能更早开始颅骨骨化。此早期骨化可能服务稳定颅形态在发育期间，尤其邻近快速生长组织区域，通过减少易变形性。当头骨线性尺寸按n放大，质量按n³增加， thereby 显著增加穿越头骨的静态力。此外，外部