新生儿调节性T细胞在多种组织中持续存在至成年期并在皮肤中高度富集

本研究针对不同组织Treg生成动力学不明确的问题，通过命运示踪技术开展Treg个体发育研究，发现淋巴器官Treg池持续更新而非淋巴组织（尤其皮肤）主要依赖新生儿期建立的Treg库，这些细胞表现出活化表型和组织驻留特征，对维持长期免疫耐受具有重要意义。

　　

在生命早期免疫系统建立过程中，Foxp3⁺调节性T细胞（Regulatory T cells, T_regs）扮演着关键角色。这些细胞不仅维持对自身抗原的免疫耐受，还调控对微生物群和食物抗原的免疫应答。尽管已知T_regs在出生后不久便开始定居于各类组织，但它们在不同组织中的生成动力学和长期维持机制仍不明确。尤其引人关注的是，新生儿时期产生的T_regs（neonatal T_regs）被发现在成年脾脏中持续存在，且表现出更强的活化状态和抑制能力，然而这些细胞在成年个体各组织T_reg库中的比例、表型特征及功能特异性仍有待深入解析。

针对这一科学问题，研究人员在《SCIENCE ADVANCES》上发表了一项系统性研究，利用先进的命运示踪技术揭示了T_reg从出生到成年期的发育动态。研究团队通过将Foxp3^{tm9(EGFP/cre/ERT2)Ayr}/J（Foxp3^iCre）小鼠与B6.Cg-Gt(ROSA)26Sor^{tm9(CAG-tdTomato)Hze/J}（R26^Tom）小鼠杂交，建立了他莫昔芬诱导的T_reg特异性标记系统。在该系统中，他莫昔芬处理可触发Cre重组酶核转位，导致tdTomato报告基因稳定表达于现存T_regs（称为TagT_regs），而处理后新生的T_regs则不表达tdTomato（称为unTagT_regs）。通过在不同周龄（出生后1-6周）给予他莫昔芬并在8周龄时分析多个组织（包括脾脏、淋巴结、肺、肝、内脏脂肪组织、结肠和皮肤），研究人员能够追溯T_reg的生成时间点并评估其组织特异性动态。

关键技术方法包括：①利用Foxp3^iCre-R26^Tom命运示踪系统进行时间特异性细胞标记；②多组织流式细胞术分析（涵盖7种淋巴与非淋巴组织）；③光谱流式细胞术采用25标志物panel进行表型鉴定；④局部4-羟基他莫昔芬皮肤涂抹实验验证组织驻留特性；⑤体内EdU（5-乙炔基-2′-脱氧尿苷）增殖测定；⑥基因集富集分析（GSEA）验证组织T_reg特征。

研究结果部分显示：

组织特异性T_reg池生成动力学

淋巴器官（脾脏和淋巴结）的T_reg池呈现持续更新模式，仅25-35%细胞在出生2周内生成。而非淋巴组织显示明显差异：皮肤和内脏脂肪组织（VAT）中高达85%和75%的T_regs在出生2周内生成，其中皮肤中60%细胞源于第一周。肺、肝和结肠呈现中间更新动态。

持续至成年期的新生儿T_regs优先表达GATA3

在结肠中，超过60%的GATA3⁺ T_regs源于出生2周内，而RORγt⁺ T_regs仅12%来自该时期。该趋势在所有组织中一致（皮肤除外），表明新生儿T_regs偏好分化为GATA3⁺亚群。

新生儿T_regs表现活化表型

光谱流式分析显示，在所有组织中，TagT_regs（新生儿来源）高表达CD44、CD69、CD73、CTLA4、ICOS、PD1和TNFR2等活化标志，而unTagT_regs（成年期生成）富集CD62L、Bcl2和TCF1等静息标志。

新生儿T_regs表达组织T_reg标志

在VAT和皮肤中，60-80%的TagT_regs表达KLRG1、ST2和CCR2等组织驻留标志，显著高于unTagT_regs（10-30%）。GSEA分析证实新生儿T_regs富集组织T_reg及其前体细胞的转录特征。

衰老小鼠中的T_reg更新

在28周龄小鼠中，新生儿来源的T_regs仍占皮肤T_reg池的35%（8周时为60%），而VAT中从40%降至10%。成年期（10周）标记实验显示淋巴器官和肺、肝中TagT_regs逐渐减少，但皮肤、VAT和结肠GATA3⁺ T_regs维持高比例。

新生儿T_regs的高增殖与皮肤驻留特性

新生儿T_regs在所有组织（除脾脏外）呈现显著增殖优势，11日龄时Ki67⁺比例达80%以上。局部他莫昔芬皮肤标记实验证实，3周龄时标记的T_regs有50%在5周后仍驻留皮肤。表型追踪显示皮肤新生儿T_regs从3周至28周保持稳定表型，而淋巴结T_regs表型随年龄变化。

研究结论与讨论部分强调：该研究首次全面揭示了T_reg生成动力学的高度组织特异性。淋巴器官维持持续更新，而非淋巴组织（尤其皮肤）主要依赖新生儿期建立的长期存在的T_reg库。这些新生儿来源的T_regs表现出独特的活化表型、组织驻留特征和II型免疫偏斜（表现为GATA3和ST2高表达），这可能是对新生儿期II型免疫环境的适应性反应。研究发现对理解免疫耐受建立具有深远意义：①阐明新生儿T_regs在塑造成年组织免疫微环境中的核心作用；②揭示IPEX综合征等早期发病免疫疾病的机制可能涉及新生儿T_reg功能缺陷；③为通过靶向新生儿免疫编程治疗免疫疾病提供新思路。该研究挑战了"组织无关性T_reg"概念，证实皮肤和VAT中T_reg具有长期驻留特性，而非自由循环。