冬虫夏草腺苷代谢酶（NT与ADA）的动力学特性及组织溯源研究：一种新型HPLC分析方法的建立与应用

本研究首次建立HPLC法测定冬虫夏草中核苷酸酶（NT）和腺苷脱氨酶（ADA）的酶动力学参数，揭示二者最适pH/温度差异及组织特异性分布（ADA仅存在于幼虫体）。该研究为优化腺苷积累、提升虫草质量控制提供了关键科学依据，填补了真菌体系中腺苷代谢酶研究的空白。

　　

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Chemicals and reagents

一磷酸腺苷（AMP；HPLC纯度≥95%）、三羟甲基氨基甲烷（TRIS；分析纯级）和马来酸（分析纯级）购自阿拉丁生化科技股份有限公司（上海）。腺苷（HPLC纯度≥95%）和肌苷（HPLC纯度≥95%）源自中国食品药品检定研究院（北京）。HPLC级甲醇购自安谱实验科技股份有限公司（上海）。其他分析纯试剂均购自国药集团化学试剂有限公司（上海）。实验用水为超纯水（18.2 MΩ·cm）。

Optimization of enzyme extraction protocols for NT and ADA from C. sinensis

为最大限度保留冬虫夏草中NT和ADA的天然构象状态，本研究选择水作为提取溶剂，且未进行进一步纯化。冰浴匀浆和冰浴浸泡是两种经典酶提取方法。匀浆可有效破坏细胞结构，增强酶溶出效率并加速酶液制备（Whitaker, 2018）。通过比较15分钟冰浴匀浆与冰浴浸泡的提取效率，发现匀浆法提取的NT和ADA活性均显著高于浸泡法（p<0.05）。因此，后续实验均采用冰浴匀浆法进行酶提取。

Conclusion

本研究首次系统阐明了冬虫夏草腺苷转化通路中的两个关键酶——NT和ADA的酶学特性、生物来源及组织分布规律。所开发的HPLC-UV方法可精准定量水提物中两种酶活性，有效保留其生理状态。相关酶学特性与调控机制的发现，为优化腺苷积累策略及提升冬虫夏草质量管理提供了重要科学依据。