利用口腔拭子与血液样本在资源有限国家开展儿童智力障碍中FMR1 CGG重复扩展检测的研究

本研究针对印度尼西亚等资源有限地区缺乏脆性X综合征（FXS）系统性筛查的问题，通过比较口腔拭子与血液样本在检测FMR1基因CGG重复扩展中的性能，发现两种样本在常规PCR检测中具有高度一致性（Kappa=1.000），首次报道雅加达地区FXS患病率为1.22%，为非侵入性筛查提供了可行方案，对推动早期诊断和干预策略具有重要意义。

　　

在遗传性智力障碍的众多病因中，脆性X综合征（Fragile X Syndrome, FXS）占据着重要地位。它是由FMR1（Fragile X Messenger Ribonucleoprotein 1）基因上的CGG三核苷酸重复序列异常扩展所引起的X连锁遗传病。男性患者通常表现出中重度智力障碍、特殊面容（如长脸、大耳）、行为异常等临床特征。FXS的发病率在男性中约为1/7000，是遗传性智力障碍最常见的单基因病因之一。然而，在印度尼西亚等资源有限的国家，缺乏系统性的筛查规划和诊断支持，导致大量患者未能被及时发现和干预。

以往在印尼中爪哇省的研究显示，FXS在智力障碍儿童中的患病率约为0.9%-1.9%，而在自闭症谱系障碍儿童中高达6.15%。尽管如此，包括首都雅加达在内的许多地区仍未有相关的流行病学数据。此外，传统的血液采样方式对于智力障碍儿童来说不仅具有侵入性，操作中也面临许多困难。因此，开发一种准确、非侵入且适用于大规模筛查的遗传检测方法，成为解决这一医疗资源分配不均衡问题的关键。

在此背景下，Siti F. Aulia、Mentari Amir、Sultana M.H. Faradz等研究人员合作开展了这项研究，论文发表于《Journal of Genetic Engineering and Biotechnology》。该研究首次在雅加达地区针对男性智力障碍学童，使用配对的口腔拭子（Buccal Swab）和血液样本，通过多种分子生物学方法对比分析了FMR1基因CGG重复扩展的检测效果，旨在评估口腔拭子作为非侵入性采样方式在FXS筛查中的可行性与一致性，并为资源有限地区的遗传病筛查提供新策略。

该研究主要依托以下几项关键技术：首先，采集164名男性智力障碍学童的配对口腔拭子和血液样本；其次，通过盐析法（血液）和商业试剂盒（口腔拭子）提取DNA；接着，使用常规PCR进行初步筛选，并通过琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物；进一步采用三重引物PCR（Triplet-Primed PCR, TP-PCR）结合熔解曲线分析（Melt Curve Analysis, MCA）对80例样本进行精细检测；最后利用荧光TP-PCR与毛细管电泳（Capillary Electrophoresis）对扩展样本进行大小确认和分类。

研究结果部分主要包括以下几个方面：

1. 1.
   常规PCR检测结果：
   在164对样本中，常规PCR成功检测出159例正常等位基因（CGG重复数≤44）、3例灰区等位基因（45–54重复）以及2例全突变（>200重复）。雅加达地区FXS的患病率为1.22%。血液与口腔拭子样本在常规PCR中显示出完全一致的结果（Cohen’s Kappa = 1.000），表明两种采样方式在该方法下具有高度一致性。
2. 2.
   TP-PCR MCA检测结果：
   在80例选定的样本中，血液样本均成功分类（78例阴性，2例阳性）；而口腔拭子样本中出现12例无法确定、2例中间型，提示其DNA质量或纯度可能影响TP-PCR MCA的表现，该方法在口腔拭子应用中仍需优化。
3. 3.
   扩展样本的大小确认：
   毛细管电泳结果显示，2例阳性样本（ID-008和ID-159）均携带超过200次CGG重复，确认为全突变类型，其临床特征包括长脸、大耳朵、扁平足、巨睾症等典型FXS表现。
4. 4.
   诊断准确性分析：
   常规PCR显示灵敏度与特异性均达100%，尽管该方法无法检测超过120次重复的较大扩展或嵌合体形态，仍不失为一种可靠的初步筛查手段。

在讨论与结论中，作者强调口腔拭子采样具有非侵入、易操作、成本低等优势，尤其适用于儿童及资源有限地区。常规PCR与口腔拭子结合使用可作为FXS一线筛查工具，而TP-PCR MCA目前更适用于血液样本。该研究不仅首次报道了雅加达地区的FXS患病情况，还提出了一套适合发展中国家的分阶段检测策略——常规PCR为初筛，TP-PCR MCA用于验证，复杂病例则进一步采用Southern印迹或甲基化分析。

该研究的推广将有助于提高FXS的早期诊断率，为患者家庭提供遗传咨询和 cascade testing（级联检测），并改善干预措施的实施效果。同时，该策略也可扩展至其他三核苷酸重复障碍疾病的筛查中，具有较高的转化与应用潜力。