脂质体纳米载体靶向颗粒细胞相互作用研究：理化特性与基因表达整合分析

本研究开发了阴离子（AnLPs）与阳离子（CatLPs）脂质体，通过探针超声与挤出法制备，系统评估其粒径（~120 nm）、PDI（<0.2）、Zeta电位（-31.7±1.4 mV vs 48.3±2.6 mV）及细胞相容性。结果表明，AnLPs全浓度生物相容，CatLPs呈剂量依赖性效应；两种脂质体均可被颗粒细胞高效内化，且12小时内未引起脂代谢、氧化应激、类固醇合成与凋亡相关基因的有害偏移，为生殖生物技术中细胞内递送平台提供新策略。

　　

Highlight

Material（材料）

脂质体（LPs）采用两种大豆来源卵磷脂：Phospholipon 90G（P90G；＞94%磷脂酰胆碱（PC））与Lipoid S45（LS45；＞45% w/w PC，10–18%磷脂酰乙醇胺（PE））（Lipoid GmbH, Germany），以及合成脂质1,2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（DOTAP）（Avanti Polar Lipids, USA）。胆固醇（Chol; Sigma-Aldrich）与罗丹明标记PE（18:1 Liss Rhod PE; Avanti Polar Lipids）用于制剂构建与标记。牛卵巢取自当地屠宰场，置于生理盐水（0.9% NaCl）中30°C保温运送。

Determination of process parameters for liposome production（脂质体制备工艺参数确定）

脂质体生产通过一系列严格控制步骤实现，每个环节均可能影响囊泡最终理化特性。为评估这些影响，我们系统调整了关键参数：磷脂类型（LS45与P90G）、胆固醇含量（20或40 mol%）与超声条件（循环数/振幅–C/A），并对所得制剂进行评价。图1总结了不同条件下制备的阴离子脂质体（AnLPs）的理化特性。

Conclusions（结论）

总体而言，本逐步研究成功制备并表征了稳定的阴离子与阳离子脂质体制剂，确立了其对颗粒细胞的安全浓度范围，并探索了其内化过程及对基因表达的短期影响。AnLPs与CatLPs制剂均展现出优异的理化特性，包括纳米级尺寸、低PDI值与稳定ζ电位，证实其作为纳米递送载体的适用性。所选AnLP配方包含LS45磷脂与20 mol%胆固醇，通过5循环/50%振幅超声制备；CatLP配方则基于P90G磷脂、20 mol%胆固醇与10 mol% DOTAP，采用相同超声参数。细胞毒性试验显示，AnLPs在所有测试浓度下均具生物相容性，而CatLPs则呈现剂量依赖性效应，最高安全浓度为37.5 μg/mL。值得注意的是，两种脂质体均能被颗粒细胞有效内化，阳离子变体更显示出长达12小时的细胞内荧光滞留。基因表达分析进一步证实，在12小时持续暴露且不更换培养基的严格条件下，两种制剂均未引起脂质代谢、氧化应激响应、类固醇生成或凋亡调控基因的显著有害偏移。这些发现突显了电荷修饰脂质体作为细胞内递送平台的潜力，尤其适用于基于细胞的应用场景，为未来通过遗传物质递送以调控细胞功能的策略奠定基础。