miR-7565通过靶向IL-13Rα1负调控大黄鱼IL-4/13介导的Th2免疫应答机制研究

本研究揭示大黄鱼（Larimichthys crocea）中miR-7565通过直接结合Il-13rα1的3'UTR区域，抑制IL-4/13信号通路中MEK1/2和4E-BP的磷酸化，进而负调控T细胞增殖/分化和B细胞增殖，为鱼类适应性免疫的miRNA调控机制提供了新见解。

　　

^{Section snippets}

^{Primary cell preparation and cell line}

原代肾白细胞（PKLs）依据既定方案制备。HEK-293T细胞（ATCC CRL-3216）接种于含1%青霉素/链霉素和10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37℃、5% CO₂培养箱中培养。

^{Bioinformatics analysis}

使用PITA和miRanda算法，基于已有数据集预测了Lcil-13rα1的潜在调控miRNA。按靶向效能排序后，选择前10个miRNA进行实验验证。 precursor miR-7565序列通过PCR扩增后克隆至pcDNA3.1载体。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-7565与Lcil-13rα1 3'UTR的靶向关系。

^{The characteristics of miR-7565 from large yellow croaker}

Lcpre-miR-7565由58个核苷酸组成，包含21bp的成熟miRNA序列。RNAfold分析显示其形成典型发夹结构。跨物种序列比对表明成熟LcmiR-7565在鱼类、哺乳类、两栖类和鸟类中高度保守，提示该miRNA在脊椎动物中具有进化保守性。通过PITA和miRanda算法预测其与Lcil-13rα1 3'UTR存在靶向结合位点。

^Discussion

大黄鱼是中国重要经济海洋鱼类，但随着养殖环境恶化，疾病发生率显著上升。miRNA通过调控免疫基因表达在免疫应答中发挥关键作用。本研究首次验证miR-7565通过靶向Lcil-13rα1负调控IL-4/13介导的MAPK/mTOR信号通路，并抑制T/B细胞免疫应答，为鱼类Th2免疫调控提供了新视角。

^{CRediT authorship contribution statement}

陈华智：实验操作、数据分析、论文撰写；刘佳梅：实验验证、数据整理；李文星：实验协助；敖金群：概念设计、论文修订；陈新华：课题构思、经费支持；穆寅楠：项目指导、论文修订。

^{Data availability}

数据可根据请求提供。

^{Declaration of competing interest}

作者声明无利益冲突。

^{Animal and human rights statements}

动物实验经福建农林大学生命科学学院伦理委员会批准，不涉及人类参与者。

^{Acknowledgements}

感谢国家自然科学基金（32473199, U23A20253, 32073007）和国家现代农业产业技术体系（CARS47-G19）的资助。