黄芪多糖与壳聚糖协同治疗盐碱水罗非鱼维罗讷气单胞菌感染：早期杀菌与长期免疫调节效应的整合

本研究首次鉴定盐碱水养殖罗非鱼烂鳃病病原体为维罗讷气单胞菌(A. veronii)，并揭示黄芪多糖(APS)与壳聚糖(CS)联用方案通过协同作用实现38.1%的死亡率降幅。其机制整合了CS的早期膜损伤杀菌效应（破坏细菌膜结构）与APS的长期免疫调节功能（调控TGF-β/IL-1β基因表达并增强抗氧化酶活性），为水产养殖抗生素替代策略提供重要理论依据。

　　

Highlight

实验鱼和伦理声明

健康实验用罗非鱼（平均体重：50±5克）取自新疆阿拉尔市长鑫渔业公司。正式实验前在25±1°C的循环水系统中用0.5% NaCl驯化两周以上，每日投喂两次商业颗粒饲料（投喂量为体重的2%）。所有实验均遵循塔里木大学实验动物中心指南， protocols经该校动物伦理委员会批准（批准号：20231102）。

盐碱水养殖罗非鱼烂鳃病病原体被分离鉴定为维罗讷气单胞菌

从罗非鱼鳃部病灶分离得到优势致病菌株并命名为ONG-1。该菌在BHI琼脂上生长旺盛，菌落呈圆形、乳白色不透明结构，表面光滑湿润，凸起明显，边缘整齐（图1A）。革兰氏染色显示ONG-1为红色小杆状细菌，经透射电镜观察证实为具有极鞭毛的革兰氏阴性菌（图1B）。生化鉴定显示其能发酵葡萄糖、蔗糖和阿拉伯糖，但不发酵肌醇（表2）。16S rRNA系统发育分析将ONG-1与A. veronii聚为一支（99.8%序列同源性），进一步通过gyrB和rpoD基因测序确认其种属（图1C）。人工感染实验证实ONG-1可重现典型烂鳃病症状，组织病理学显示鳃丝上皮增生、融合及充血（图1D）。

讨论

本研究通过形态学、生化和分子分析系统鉴定A. veronii菌株ONG-1为盐碱水养殖罗非鱼烂鳃病的病原体。从鳃坏死病灶分离的ONG-1在BHI琼脂上呈现典型圆形乳白色菌落，革兰氏阴性杆状形态及极鞭毛特征（透射电镜观察）与A. veronii特性一致（Hu等，2023）。生化特征（发酵葡萄糖/蔗糖/阿拉伯糖而非肌醇）与先前报道的A. veronii谱系高度吻合（Orozova等，2017）。系统发育分析基于16S rRNA、gyrB和rpoD基因序列，明确将ONG-1归类于A. veronii进化枝，支持其作为盐碱环境适应性病原体的地位。人工感染后重现烂鳃病临床症状（鳃组织坏死、出血）和组织病理变化（上皮增生、 lamella融合），符合Koch法则的致病性确认标准。值得注意的是，盐碱环境（pH 8.5–10.0, Na⁺ > 50 mmol/L）可能通过选择压力增强A. veronii的致病适应性：该菌上调Na⁺/H⁺逆向转运蛋白和胞外多糖编码基因，促进其在渗透胁迫下定植鳃组织（Hu等，2023；Tekedar等，2019）。

Conclusion

本研究鉴定A. veronii（ONG-1）为盐碱水罗非鱼烂鳃病病原体，并阐明APS、CS和CS+APS的独特作用。CS发挥直接早期杀菌效应，在感染初期更有效降低组织/血液细菌载量并缓解急性损伤；APS则通过增强持续免疫功能和上调抗炎/抗菌基因（如TGF-β、hepcidin），在后期发挥更显著的长期免疫调节作用。CS+APS通过协同整合即时病原清除（CS介导的膜破坏）与持续免疫增强（APS介导的抗氧化/细胞因子调节）实现最佳疗效，为盐碱水养殖中抗生素替代策略提供新模式。