组蛋白去乙酰化酶与PI3K双重抑制通过稳定细胞质lkBa协同诱导p53突变弥漫大B细胞淋巴瘤凋亡的治疗新策略

本研究针对TP53突变弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）临床治疗难题，通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺与PI3K抑制剂杜韦利西布的联合用药策略，系统阐明了双重靶向干预通过稳定lkBa蛋白、抑制NF-κB-p65磷酸化与核转位、同时阻断自噬流的协同抗肿瘤机制。该方案在细胞模型、动物实验及临床样本中均显著诱导凋亡并抑制增殖，为p53突变DLBCL提供了具有临床转化前景的创新治疗思路。

　　

在血液系统恶性肿瘤研究领域，弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）作为非霍奇金淋巴瘤中最具侵袭性的亚型之一，约占所有病例的30%-40%。尽管R-CHOP方案作为一线治疗方案已广泛应用，但约30%患者特别是携带TP53突变的患者仍面临治疗反应不佳和早期复发的困境。研究表明，TP53突变型DLBCL患者中位总生存期显著缩短，3年生存率仅为65.1%（野生型为80.6%）。这种治疗抵抗性主要源于p53功能缺失导致的DNA损伤应答缺陷和凋亡抵抗，加之NF-κB信号通路的持续激活和自噬过程的增强，共同构成了肿瘤细胞生存的复杂调控网络。

针对这一临床难题，厦门大学医学院附属第一医院血液科的研究团队在《Cell Death Discovery》上发表了创新性研究成果。研究人员通过整合细胞模型、动物实验和临床样本分析，系统评估了组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）西达本胺（Chidamide）与PI3K抑制剂杜韦利西布（Duvelisib）的协同治疗潜力。

研究采用的主要技术方法包括：利用p53突变DLBCL细胞系（TMD8、Toledo、DB）和原代临床样本进行体外药效学评价；建立小鼠异种移植模型进行体内疗效验证；通过RNA测序（RNA-seq）和基因集富集分析（GSEA）解析信号通路变化；采用蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀和质谱分析等技术探索分子机制；使用免疫组化、免疫荧光和电镜观察等技术进行表型验证。临床样本来源于12例DLBCL患者（6例TP53突变型和6例野生型）。

联合用药显著促进p53+DLBCL细胞凋亡并抑制增殖

研究人员通过Annexin V/PI双染色流式细胞术发现，西达本胺与杜韦利西布单药均能诱导p53突变DLBCL细胞凋亡，而联合用药在24小时和48小时均表现出显著增强的协同效应。CCK-8实验证实联合用药呈剂量和时间依赖性地抑制细胞增殖，联合指数（CI）计算显示协同作用。RNA-seq与GSE分析表明联合治疗显著富集凋亡相关通路（p<0.001）。Western blotting检测到cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和cleaved PARP等凋亡标志蛋白表达上调，而癌蛋白c-Myc表达下调。

联合治疗抑制p53突变DLBCL异种移植瘤生长

在TMD8细胞构建的小鼠异种移植模型中，联合用药组显著抑制肿瘤体积和重量，且优于单药治疗。小鼠体重未受显著影响，表明治疗安全性良好。组织学分析显示联合治疗组肿瘤细胞增殖标志Ki67和PCNA表达降低，TUNEL染色显示凋亡细胞增加。生存分析表明联合治疗组小鼠总生存期显著延长。

西达本胺联合杜韦利西布通过抑制自噬促进凋亡

临床样本RNA-seq分析显示p53突变DLBCL中自噬通路显著富集。联合用药后自噬相关基因LC3和beclin1表达下调，GSEA显示自噬通路负向富集（p<0.001）。Western blotting和免疫荧光证实beclin1和LC3表达减少，电镜观察显示自噬溶酶体形成减少。过表达beclin1可部分挽救联合用药诱导的凋亡效应。数据库分析显示LC3低表达与DLBCL患者良好预后相关。

联合治疗通过抑制NF-κB p65核转位和磷酸化抑制自噬并促进凋亡

p53突变DLBCL临床样本中NF-κB信号通路显著富集。联合用药后NF-κB通路负向富集（p<0.001）。Western blotting和免疫荧光显示磷酸化NF-κB p65（p-p65）表达降低。过表达p65可部分恢复beclin1表达并减弱凋亡效应，表明NF-κB抑制在联合治疗中的关键作用。

杜韦利西布和西达本胺通过选择性靶向PI3Kδ和HDAC2稳定细胞质lkBa

机制研究表明，杜韦利西布抑制PI3Kδ而非PI3Kγ亚型，降低IKK和lkBa磷酸化水平；西达本胺特异性抑制HDAC2而非HDAC1/3/10。质谱分析发现西达本胺处理组组蛋白H1.5与lkBa相互作用增强，组蛋白H1.5乙酰化水平升高，但lkBa本身乙酰化未改变。进一步研究发现西达本胺通过抑制HDAC2介导组蛋白H1.5第67和93位赖氨酸（K67/K93）乙酰化，增强其与lkBa结合，稳定lkBa并抑制p65活化。

联合用药对p53突变DLBCL原代细胞具有协同靶向作用

原代细胞实验证实，联合用药在p53突变和野生型DLBCL原代细胞中均诱导显著凋亡，并抑制NF-κB p65核转位，验证了临床转化潜力。

研究结论与讨论部分指出，该研究首次揭示了西达本胺与杜韦利西布联合治疗通过双重机制稳定lkBa蛋白：杜韦利西布通过抑制PI3Kδ减少IKK介导的lkBa磷酸化降解；西达本胺通过抑制HDAC2增强组蛋白H1.5 K67/K93位点乙酰化，促进组蛋白H1.5-lkBa相互作用。这种协同作用有效抑制NF-κB p65磷酸化与核转位，同时阻断细胞保护性自噬，最终导致肿瘤细胞凋亡。

该研究的创新性在于发现组蛋白H1.5作为lkBa稳定性的新型调控因子，并阐明其乙酰化修饰在NF-κB信号调控中的关键作用。从转化医学角度，该联合策略利用已临床可及药物，克服了直接靶向突变p53的治疗挑战，为p53突变DLBCL这一高危人群提供了具有即时临床转化潜力的治疗新方案。同时，研究中观察到的联合用药安全性特征（如对IL-6/IL-17水平的影响较小）也支持其临床开发价值。未来研究需进一步验证该方案在临床试验中的疗效与安全性，以及与现有治疗方案（如地西他滨-R-CHOP）的比较优势。