双链LNA-TaqMan实时定量PCR技术开发用于番鸭鹅细小病毒强毒株与弱毒株的鉴别检测

本研究建立了一种基于LNA-TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR（qPCR）方法，可高特异性、高灵敏度（检测限达6.1×100 copies/μL）地区分番鸭鹅细小病毒（MDGPV）的强毒株与弱毒株，为水禽 parvovirus 疫情防控提供了有效的分子诊断工具。

　　

Highlights

Viruses and Clinical Samples

强毒株MDGPV-PT、弱毒株MDGPV-D、番鸭细小病毒（MDPV）、经典鹅细小病毒（C-GPV）、短喙侏儒综合征病毒（SBDSV）、鸭瘟病毒（DEV）、鸭副粘病毒（DPMV）、鸭甲型肝炎病毒I型（DHV-I）以及鸭坦布苏病毒（DTMUV）均由福建省农业科学院畜牧兽医研究所病毒实验室保存。自2023年以来，从福建省多个鸭场采集的临床样本（包括肝脏、脾脏、胰腺和肾脏组织）均用于本研究。

Optimization of LNA-TaqMan qPCR Reaction

通过评估不同反应条件（包括引物和探针浓度、退火/延伸温度等）对实时LNA-TaqMan qPCR反应参数进行优化。如图1所示，两种病毒的最佳最终引物浓度均为0.4 μmol/L，而强毒株的探针浓度为0.2 μmol/L，弱毒株为0.4 μmol/L。最佳退火/延伸温度确定为60°C。

Discussion

MDGPV是一种重组病原体，可引起水禽严重的肠道和多器官疾病，由于病毒重组和持续突变，其感染谱正在不断扩大（Liu et al., 2024; Sallam et al., 2022）。近年来，MDGPV在多个地区持续暴发，对水禽产业构成了重大威胁（Zhang et al., 2024）。准确诊断对于疾病防控至关重要；然而，弱毒疫苗的广泛使用给区分野生型（强毒）和疫苗型（弱毒）毒株带来了挑战。本研究基于VP1基因建立的LNA-TaqMan双重qPCR方法，为MDGPV的早期诊断和定量检测提供了创新性解决方案。