双重靶向PI3K-mTOR通路通过抑制EZH2双功能轴重塑免疫微环境并克服三阴性乳腺癌转移与免疫治疗抵抗

本文推荐了一项针对三阴性乳腺癌（TNBC）的重要研究，揭示了双重抑制PI3K-mTOR通路（使用paxalisib）不仅能抑制肿瘤增殖、迁移及转移起始细胞（MIC）表型，还可诱导间质-上皮转化（MET），降低IL-6等炎症因子，激活病毒模拟（viral mimicry）信号，重塑肿瘤免疫微环境（TME），减少耗竭T细胞（Tex）、调节性T细胞（Treg）和肥大细胞，并协同免疫检查点抑制剂（抗PD-1）增强抗肿瘤免疫反应。研究进一步发现该通路通过调控p85β-EZH2-H3K27Me3抑制轴和EZH2-NF-κB激活轴，双重抑制EZH2的催化与非催化功能，为克服TNBC转移和免疫治疗耐药提供了新策略。

　　

双重PI3K–mTOR阻断抑制增殖与迁移并诱导间质-上皮转化

研究团队通过体外实验比较了多种PI3K抑制剂与PI3K-mTOR双重抑制剂在三阴性乳腺癌细胞系（包括MDA-MB-231、MDA-MB-468、SUM149PT及小鼠4T1模型）中的效果。结果显示，双重PI3K-mTOR抑制剂（如paxalisib、omipalisib、apitolisib和dactolisib）的半数抑制浓度（IC₅₀）显著低于泛PI3K或亚型特异性PI3K抑制剂，尤其在MDA-MB-231细胞中，paxalisib的IC₅₀值低于2.5 μmol/L。划痕实验进一步证明，paxalisib处理可有效抑制MDA-MB-231和4T1细胞的迁移能力。

值得注意的是，paxalisib处理诱导了间质-上皮转化（MET），表现为波形蛋白（vimentin）表达下调而上皮钙黏蛋白（E-cadherin）表达上调。流式细胞术分析显示，CD44^high/CD24^low肿瘤干细胞（CSC）群体比例降低67%。此外，与转移起始细胞（MIC）相关的耐药标志物（ABCB5、ALDH1、Snail）及持久性癌细胞表型标志物（NF-κB p65、FOXQ1、NNMT、NRF2）的蛋白表达均显著下降。在患者来源的循环肿瘤细胞（CTC）中，paxalisib处理还降低了IL-6的表达，并诱导了病毒模拟相关基因（如GBP2）的上调，提示其可能增强肿瘤免疫可见性。

Paxalisib体内降低原发肿瘤负荷与转移并展现良好安全性

在自发转移的4T1三阴性乳腺癌模型中，paxalisib（7.5 mg/kg）与抗PD-1联合使用显著降低了原发肿瘤的体积和重量，且三联方案（paxalisib + 抗PD-1 + Abraxane）效果最为显著。该剂量下未观察到肝毒性，而更高剂量则出现肝损伤和代谢异常。

通过尾静脉注射建立的血行转移模型进一步证实，联合治疗显著减少了循环肿瘤细胞（CTC）的数量及肺转移结节（包括突出型和平坦型）。组织病理学分析显示，治疗组肺部白细胞浸润和脾脏髓外造血均减少，表明系统性疾病得到控制。

空间成像揭示paxalisib联合免疫治疗重塑免疫细胞景观

利用CODEX多重成像技术对肿瘤微环境进行高维分析，发现paxalisib + 抗PD-1处理改变了肿瘤内免疫细胞的比例和空间分布。联合治疗增加了B细胞和中性粒细胞在肿瘤中心的浸润，而树突状细胞（DC）聚集于周边，巨噬细胞和基质细胞则普遍减少。细胞邻域分析（Cellular Neighborhood, CN）识别出10个独特的细胞邻域，其中B细胞和中性粒细胞富集的邻域在联合治疗组中增加，而巨噬细胞主导的邻域减少。

PI3K–mTOR抑制增强抗肿瘤免疫谱

NanoString nCounter分析显示，paxalisib单独或联合抗PD-1处理均增强了抗肿瘤免疫应答，包括抗原呈递、T细胞受体（TCR）信号、细胞毒性和干扰素（IFN）反应通路。细胞丰度估算提示，细胞毒性细胞、DC、T细胞和B细胞数量增加，而耗竭T细胞（T_ex）和调节性T细胞（Treg）减少。关键细胞毒性介质如颗粒酶B（GZMB）和IFNγ的表达上调。此外，促肿瘤的肥大细胞群体也被抑制，这一发现通过甲苯胺蓝染色得到组织学验证。

PI3K–mTOR抑制靶向p85β–H3K27Me3相互作用

研究证实p85β（由PIK3R2编码）在TNBC患者样本和小鼠肿瘤细胞核中表达。paxalisib处理降低了核内p85β和H3K27me3的水平，并破坏了两者的共定位。在化疗后的患者外周血单核细胞（PBMC）中，p85β与H3K27me3的相互作用增强，提示其与耐药相关。

PI3K–mTOR抑制靶向EZH2的双重功能

EZH2作为关键表观调控因子，既可通过催化H3K27me3沉积沉默基因（经典抑制功能），也可作为转录共激活因子与NF-κB p65结合激活基因表达（非催化功能）。paxalisib处理降低了EZH2的mRNA和核蛋白水平，并减少了p85β:EZH2及NF-κB:EZH2的相互作用。染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）与nCounter数据整合分析发现，paxalisib和联合治疗上调的差异表达基因中，许多是EZH2的靶基因，且部分基因同时被H3K27me3和NF-κB2结合，包括IL-6、FOXQ1、NNMT、RELA、NFE2L2和KRT14等与炎症、耐药和转移相关的基因。

PIK3R2表达与TNBC患者生存相关

对公共数据库的分析表明，PIK3R2高表达与基底样/TNBC患者较差的远处转移免费生存（DMFS）相关。在接受化疗联合免疫治疗的转移性TNBC患者中，PIK3R2高表达者总生存期更短。在新辅助化疗后残留肿瘤的患者中，PIK3R2高表达与远处复发正相关，提示其可作为预后和预测性生物标志物。

讨论与意义

该研究深入阐释了双重靶向PI3K-mTOR通路在三阴性乳腺癌中的多效性作用。一方面，paxalisib通过抑制MIC表型（包括CSC、持久性癌细胞）、减少炎症因子（如IL-6）和激活病毒模拟信号，克服耐药并增强免疫可见性；另一方面，它通过抑制p85β核转位，破坏p85β-EZH2-H3K27me3抑制复合物，并干扰EZH2-NF-κB激活轴，双重靶向EZH2的催化与非催化功能，从而抑制转移并重塑免疫微环境。

这些发现为联合使用PI3K-mTOR抑制剂与免疫检查点抑制剂治疗TNBC提供了强有力的理论依据，尤其为免疫治疗耐药的患者提供了新的治疗策略。同时，PIK3R2/p85β作为预测性生物标志物，有望用于识别最可能从该靶向治疗中获益的患者群体。