综述：外泌体非编码RNA：癌症与癌症干细胞之间的串话中介

本综述系统阐释了肿瘤微环境（TME）中，外泌体非编码RNA（ncRNA）介导的癌症干细胞（CSC）与非CSC细胞间的双向通讯机制。文章揭示外泌体ncRNA通过调控干性标记物（如CD44、CD133、OCT4）和关键信号通路（如Wnt/β-catenin、Notch、PI3K/AKT/mTOR），增强CSC干性、促进转移、血管生成、化疗耐药及免疫抑制。这些发现为开发靶向外泌体ncRNA的液体活检标志物、治疗靶点及药物递送系统提供了框架，对克服耐药性恶性肿瘤具有重要临床意义。

　　

癌症干细胞

癌症干细胞（CSC）是肿瘤中一小群具有自我更新、多向分化和启动肿瘤形成能力的细胞亚群，常被称为癌症的“种子”。自1997年在白血病中首次被发现以来，CSCs已在多种实体瘤（如乳腺癌、脑癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌等）中被鉴定和分离。尽管CSCs仅占肿瘤细胞的0.01%–2%，却在癌症发生、进展、转移和复发中起关键作用。CSCs通常处于休眠状态且表达多种耐药分子，因此对化疗药物具有显著抵抗性。此外，CSCs还表现出“可塑性”，在内在和外在因素影响下可分化为适应环境变化的多种癌细胞亚型，显著促进肿瘤生长、转移和治疗抵抗，这也是肿瘤异质性的主要来源之一。

CSCs的起源尚不明确，现有假设包括：正常干细胞与癌细胞融合、正常干细胞转化、遗传不稳定性以及细胞微环境影响。目前，体外肿瘤球形成实验和体内有限稀释实验被认为是鉴定CSCs的金标准。此外，CSCs表面标志物（如CD44、CD133、OCT4、EpCAM、ALDH）及其相关信号通路（如Wnt/β-catenin、Notch、PI3K/AKT/mTOR）的调控也可作为CSCs的特异性指标。

外泌体与外泌体非编码RNA的功能和特性

外泌体是直径30–150 nm的细胞外囊泡，由多种细胞分泌，广泛存在于生物体液中。它们在介导细胞间通讯、参与肿瘤发生、进展、转移、耐药和治疗反应中扮演关键角色。外泌体的功能主要源于其富含的生物活性分子，包括蛋白质、脂质和核酸（DNA、mRNA和ncRNA）。蛋白质如CD9、CD63和CD81增强外泌体的识别和靶向能力；核酸促进细胞间通讯和基因调控；脂质双层膜则提供稳定性和保护作用。

外泌体的形成始于质膜的内陷，形成早期内体。通过多种复杂机制（如ESCRT依赖和非依赖途径），蛋白质、脂质和核酸在内体中积累形成腔内囊泡（ILVs），进而成熟为多囊体（MVBs）。MVBs可与溶酶体融合降解，或与质膜融合释放外泌体。MVBs的运输和融合受Rab GTP酶家族（如Rab27a/b）调控。外泌体可通过膜融合、内吞、膜突起吞噬或受体-配体结合等方式被靶细胞摄取。

非编码RNA（ncRNA）不编码蛋白质，但在转录、转录后和翻译水平调控基因表达，在细胞周期和分化等过程中起重要作用。根据大小，ncRNA主要分为microRNA（miRNA）、长链非编码RNA（lncRNA）和环状RNA（circRNA）。miRNA长约20–24核苷酸，通过引导RISC复合物降解靶mRNA或抑制其翻译，在转录后水平调控基因表达。lncRNA长度超过200核苷酸，可参与表观遗传、转录和转录后调控。circRNA长度通常在200–1200核苷酸之间，呈环状结构，不易被核酸酶降解，稳定性更高。它们可作为miRNA海绵、调控基因转录和蛋白质翻译，以及与RNA结合蛋白相互作用。

外泌体中ncRNA的分选机制主要受脂质和蛋白质调控。例如，中性鞘磷脂酶2（nSMase2）正调控外泌体中miRNA的数量；hnRNPA2B1通过结合EXO motif控制特定miRNA亚群加载入外泌体；Argonaute 2（AGO2）作为miRISC的关键组分，在miRNA包装和转移中起重要作用。circRNA的分选则受核糖体蛋白和延伸因子等RNA结合蛋白调控。

非CSC来源的外泌体ncRNA在CSC干性中的作用

肿瘤微环境（TME）由CSCs、非CSC肿瘤细胞、免疫细胞、癌症相关成纤维细胞（CAFs）、内皮细胞（ECs）、细胞外基质（ECM）及多种信号分子组成。非CSC细胞分泌的外泌体ncRNA可通过上调干性标记物表达和激活干性相关信号通路增强CSC干性。

例如，胰腺癌、口腔鳞状细胞癌、结直肠癌、骨肉瘤和鼻咽癌等肿瘤的外泌体可通过ncRNA上调CD44、CD133、OCT4、Sox2和Nanog等干性标记物，维持CSC干性，增强其侵袭、迁移能力和化疗抵抗。在卵巢癌中，miR-328-3p通过抑制DDB2表达增强CSC干性和活性。间充质干细胞（MSCs）来源的外泌体ncRNA（如miR-155和miR-142-3p）也可调控多种CSCs的干性特性。CAFs来源的外泌体在缺氧条件下可增加CD44、CD133、OCT4和Sox2蛋白表达，促进CSC数量增加和肿瘤耐药。免疫细胞如M2巨噬细胞分泌的外泌体富含miR-27a-3p，可降低硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）表达，支持肝癌CSC的维持和激活。

外泌体ncRNA还可通过激活干性相关信号通路调控CSC干性和肿瘤发生。Wnt信号通路在维持干细胞特性中起核心作用，其异常激活显著促进肿瘤发生和CSC自我更新。例如，lncRNA PKMYT1AR通过吸附miR-485-5p激活Wnt/β-catenin通路，促进非小细胞肺癌（NSCLC）CSC干性维持。肺腺癌（LUAD）中上调的miR-1275同时激活Wnt/β-catenin和Notch信号通路，维持干细胞样表型。Notch信号通路异常激活与CSC增殖和耐药密切相关，miR-600通过抑制KLF6表达上调Notch1表达，增强Notch通路活性，促进卵巢癌细胞干性维持和转移潜力。其他信号通路如PI3K/AKT、STAT3和mTOR也可被外泌体ncRNA调控，进而影响CSC干性。

CSC来源的外泌体ncRNA在肿瘤进展中的作用

CSC来源的外泌体ncRNA可促进非CSC细胞的干性转化，加速肿瘤转移、诱导血管生成、增强耐药性、重编程肿瘤代谢，并创建促肿瘤和免疫抑制的微环境。

CSC外泌体含有更高水平的干性标记物和蛋白质，可转移至非CSC细胞增强其干性。例如，miR-146a-5p通过抑制Numb表达影响结直肠CSC中PKH26标记囊泡的分布，驱动CSC不对称分裂。CD133⁺结直肠CSC分泌的外泌体携带circRNA ABCC1，激活Wnt/β-catenin通路，增强非CSC干性表型和球体形成能力。食管CSC来源的外泌体lncRNA FMR1-AS1通过结合TLR7激活NFκB信号通路，促进c-Myc表达，增强非CSC干性。甲状腺CSC来源的lncRNA DOCK9-AS2激活Wnt/β-catenin通路，促进肿瘤干性维持和恶性进展。

外泌体ncRNA还通过诱导上皮间质转化（EMT）促进CSC分化和转移。胰腺导管腺癌（PDAC）外泌体携带lncRNA Sox2ot，通过结合miR-200c调控Sox2表达，增强EMT过程和干性特性。肝癌CSC来源的外泌体circ-ZEB1和circ-AFAP1增加干性标记物CD133表达，降低E-cadherin和EpCAM表达，促进EMT和肝癌进展。

在肿瘤转移方面，CSC外泌体ncRNA通过诱导EMT和建立转移前生态位显著促进肿瘤转移和生长。例如，肺癌CSC外泌体通过miR-210-3p上调N-cadherin、vimentin、MMP9和MMP1表达，下调E-cadherin，促进肺癌转移。甲状腺癌CSC外泌体高表达lncRNA MALAT1和linc-ROR，可诱导正常甲状腺细胞EMT表型。肾细胞癌干细胞外泌体传递miR-19b-3p诱导EMT和转移。肝癌CSC外泌体上调miR-21、lncTuc339、lncHEIH和PI3K等ncRNA，影响Bcl2、TGFβ1、NFκB和MMP9 mRNA水平，诱导EMT和增强肿瘤侵袭性。

外泌体ncRNA还通过调节肿瘤微环境、促进血管生成和调控耐药性促进肿瘤转移。例如，结直肠CSC外泌体增强骨髓中性粒细胞活性，促进肿瘤特性；卵巢癌外泌体miR-205通过PTEN-AKT通路诱导血管生成促进转移；黑色素瘤CSC外泌体传递miR-4535抑制自噬通路，增强肿瘤转移能力。

在血管生成方面，CSC外泌体通过与ECs和基质细胞相互作用调节血管生成因子表达，激活相关信号通路促进肿瘤血管形成。胶质母细胞瘤CSC外泌体miR-26a通过抑制PTEN激活PI3K/Akt通路，增强肿瘤生长和转移；miR-21上调VEGF表达促进ECs血管生成。肝癌CD90⁺ CSC外泌体传递lncRNA H19促进血管生成表型。缺氧条件下肺癌细胞外泌体携带miR-23a靶向脯氨酰羟化酶和紧密连接蛋白ZO-1促进血管生成。口腔癌CSC外泌体通过上调miR-21-5p和TGF-β1激活β-catenin/mTOR/STAT3通路，将正常成纤维细胞转化为CAFs增强致癌潜力。卵巢CSC外泌体与MSCs共培养可增加IL-6、IL-8和VEGFA表达，促进血管生成和基质重塑。

在耐药性方面，CSC外泌体ncRNA通过改变凋亡通路、增强药物外排和诱导敏感细胞耐药促进肿瘤耐药。例如，肝癌外泌体miR-221靶向caspase-3抑制细胞凋亡，增加索拉非尼耐药；胶质瘤CSC外泌体miR-30b-3p靶向RHOB降低凋亡能力，促进替莫唑胺耐药；胰腺癌CSC外泌体miR-210诱导敏感细胞耐药，上调MDR1、YB-1和BCRP等耐药相关蛋白，激活mTOR信号通路。乳腺癌化疗耐药细胞可通过CSC外泌体转移P-糖蛋白（P-gp）诱导敏感细胞耐药。乳腺癌CSC外泌体miR-155下调C/EBP-β抑制TGF-β、C/EBP-β和FOXO3a表达，促进EMT和化疗耐药。

在免疫抑制方面，CSC外泌体携带免疫抑制分子降低免疫细胞活性，促进肿瘤细胞免疫逃逸。例如，脑CSC外泌体含tenascin-C（TNC）通过整合素受体抑制T细胞mTOR信号通路减少T细胞活性；CSC外泌体高表达PD-L1与T细胞受体结合抑制T细胞激活；CSC通过激活EMT/β-catenin/STT3/PD-L1信号轴促进PD-L1 N-糖基化稳定其蛋白结构增强免疫逃逸能力；结直肠CSC外泌体miR-17-5p抑制SPOP表达上调PD-L1促进肿瘤生长和抑制抗肿瘤免疫；CSC高表达CD47与巨噬细胞SIRPα受体结合发送“别吃我”信号逃避免疫清除。此外，CSC外泌体可破坏肿瘤抗原呈递，减少免疫反应。例如，黑色素瘤、胶质母细胞瘤、肺癌和结直肠癌中CSC的HLA I类或TAP分子表达显著低于非CSC；肾CSC外泌体诱导树突状细胞异常分化增加未成熟树突状细胞抑制免疫功能；胰腺癌细胞外泌体miR-212-3p抑制RFXAP表达降低MHC II表达诱导免疫耐受；乳腺癌CSC外泌体下调NKG2D配体（MICA和MICB）表达削弱NK细胞识别和杀伤能力。

CSC外泌体还可通过与TME中多种免疫细胞相互作用调节免疫反应，削弱免疫系统对CSC的识别和清除。例如，口腔鳞状CSC外泌体传递lncRNA UCA1结合miR-134靶向LAMC2调控巨噬细胞PI3K/AKT通路促进M2巨噬细胞极化；结直肠CSC外泌体传递miR-146a增加肿瘤浸润CD66⁺中性粒细胞减少CD8⁺ T细胞抑制TME；胶质瘤CSC外泌体lncRNA MALAT1诱导LPS刺激的小胶质细胞分泌IL-6和TNF-α促进肿瘤恶性进展；结直肠CSC外泌体含三磷酸RNA通过模式识别受体与NF-κB信号轴相互作用诱导中性粒细胞IL-1β表达延长其生存期，加速结直肠癌进展。

在肿瘤代谢调控方面，CSC外泌体ncRNA通过调节代谢酶表达或活性改变肿瘤细胞代谢通路影响能量供应和物质代谢控制肿瘤生长和转移。单羧酸转运蛋白（MCT1和MCT4）在肿瘤细胞与CSC代谢协作中起关键作用。头颈鳞状细胞癌中肿瘤细胞高表达MCT4，CSC主要表达MCT1，最大化肿瘤细胞生存和增殖。结直肠癌外泌体携带ciRS-122通过吸附miR-122上调丙酮酸激酶M2（PKM2）表达促进糖酵解增强化疗耐药。乳腺癌CSC外泌体circCARM1通过吸附miR-1252-5p调控PFKFB2基因表达在糖酵解过程中起关键作用。外泌体lncRNA SNHG3作为miR-330-5p海绵正向调控PKM表达抑制氧化磷酸化（OXPHOS）增加糖酵解促进乳腺癌细胞生长。肺癌CSC外泌体lncRNA Mir100hg靶向miR-15a-5p和miR-31-5p增强糖酵解活性增加肿瘤转移潜力。黑色素瘤CSC外泌体lncRNA Mir100hg通过调控miR-16-5p和miR-23a-3p表达增强糖酵解促进转移。肺癌CSC外泌体lncRNA ROLLCSC作为miR-5623-3p和miR-217-5p的竞争性内源RNA靶向脂代谢通路增强非CSC细胞可塑性促进肿瘤进展。缺氧条件下胶质瘤CSC外泌体高表达lncRNA H-GSC调控MZF1/c-Myc/HIF-1α轴显著促进肿瘤细胞增殖和糖酵解代谢。

外泌体ncRNA的临床应用

外泌体ncRNA在癌症中表现出独特的表达模式，使其成为潜在的生物标志物。由于其稳定性和易于在体液中检测，外泌体ncRNA被认为是早期癌症诊断、预后预测和疾病监测的理想候选者。例如，血清外泌体表面蛋白可作为喉癌早期诊断的高特异性指标；外泌体circSHKBP1参与胃癌恶性进展可作为诊断和预后评估的生物标志物；与常规胃癌标志物（CEA、CA-199、CA-724）相比，外泌体来源的lncRNA-GC1对胃癌具有更高的诊断价值；外泌体miRNA（let-7A、miR-1229、miR-1246、miR-150、miR-21、miR-223和miR-23a）已被确定为结直肠癌（CRC）的诊断生物标志物；lncRNA GAS5和miR-221在组织、血浆和外泌体中的高表达对CRC具有诊断价值；血清外泌体circ0048117与食管癌TNM分期正相关可作为疾病进展监测标志；循环外泌体miRNA-21和lncRNA-ATB与肝细胞癌（HCC）患者总生存期负相关可作为预后生物标志；血清外泌体circ-PDE8A水平与胰腺腺癌（PADC）淋巴浸润、TNM分期和低生存率正相关可作为重要预后生物标志。此外，肝癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌患者体液中CSC来源的外泌体miRNA与正常人体液中的miRNA含量显著不同，表明CSC来源的外泌体有望作为早期诊断和预测转移的标志物。

外泌体ncRNA作为治疗靶点也展现出潜力。通过抑制这些ncRNA的表达或功能可有效抑制癌细胞生长和转移改善治疗结果。例如，沉默AGO2可损害RISC功能解除致癌miRNA（如miR-155和miR-21）对抑癌基因的抑制激活caspase依赖的凋亡通路诱导髓系白血病细胞凋亡；辅助蛋白Vps4A抑制肝癌外泌体致癌miRNA分泌促进抑癌miRNA分泌显著抑制肿瘤生长；抗癌肽PEG-SMR-Clu抑制外泌体释放减少ncRNA表达引起乳腺癌细胞G2/M期阻滞限制转移和血管生成；反义寡核苷酸（ASOs）可在遗传水平阻断致病蛋白或ncRNA合成；胶质母细胞瘤（GBM）异种移植模型中递送抗miR-21反义寡核苷酸可阻断miR-21 mRNA翻译触发肿瘤细胞凋亡；敲除HIF-1α可抑制外泌体对血管生成和迁移相关因子的调控抑制GBM细胞生长和侵袭性；修饰外泌体表面特性或设计细胞表面受体拮抗剂可阻断ncRNA摄取通路部分抑制肿瘤生长和进展。例如，衰老细胞表面丰富的二肽基肽酶4（DPP4）可部分阻止携带ncRNA的外泌体摄取，DPP4抗体或抑制剂可显著提高外泌体摄取效率为肿瘤治疗提供新途径。

针对CSC来源的外泌体ncRNA可破坏CSC与TME或远处细胞间的信号传递提供克服治疗耐药的创新策略。当前研究主要集中于使用特定药物或抑制剂减少CSC外泌体分泌降低其对周围细胞和微环境影响减少肿瘤生长和转移潜力。例如，低剂量IFN-α处理可减少恶性黑色素瘤CSC外泌体分泌显著降低其致瘤潜力和干性；中药肉桂可通过下调hsa-miR-21和hsa-miR-375等20多种miRNA表达抑制脑CSC和乳腺CSC生长增殖作为放疗或化疗的有效辅助增强抗肿瘤疗效减轻化疗相关副作用；ovatodiolide处理可通过减少CSC外泌体中miR-21-5p等物质使CSC对顺铂敏感抑制口腔鳞状细胞癌发生；III期药物Erismodegib通过抑制miR-21表达和上调miR-128抑制EMT诱导胶质瘤干细胞样细胞凋亡；抑制EP4信号可减少CSC外泌体分泌显著降低CSC数量减弱CSC对常规化疗药物的内在耐药性；多西他赛治疗后乳腺癌外泌体中miR-9-5p、miR-195-5p和miR-203a-3p表达增加增强CSC表型和细胞耐药，阻断外泌体miRNA-ONECUT2轴可减弱CSC干性和致瘤潜力降低化疗耐药；阿司匹林可通过HIF-1α/COX-2通路抑制缺氧条件下外泌体释放减少CSC数量抑制肿瘤细胞增殖、迁移和血管生成。

外泌体作为天然递送载体具有理想的纳米尺寸和稳定膜结构可有效携带和保护药物防止降解和失活。近年来外泌体由于其相对安全、易修饰的理化性质、可扩展性、低成本和强负载能力逐渐应用于药物递送领域。非编码RNA作为各种疾病（包括癌症）的基因治疗载体因其潜力而受到广泛关注。通过工程技术将外源性肿瘤抑制ncRNA加载到外泌体中递送至肿瘤部位可有效抑制肿瘤进展。

外泌体靶向递送至肿瘤细胞可精确递送治疗性ncRNA增强癌症治疗效果减少治疗相关副作用具有显著的临床应用潜力和前景。例如，将miR-186加载到外泌体中递送至神经母细胞瘤原位小鼠模型可减少肿瘤负荷提高生存率显示外泌体递送miR-186在神经母细胞瘤中的治疗潜力；将miR-145-5p转染到外泌体中靶向递送至胰腺癌细胞可显著增加肿瘤细胞凋亡明显抑制肿瘤生长；使用电穿孔将miR-499加载到BM-MSCs来源的外泌体中递送至肿瘤部位可显著抑制子宫内膜癌细胞增殖、EC管形成抑制肿瘤生长和血管生成；lncRNA MEG3对骨肉瘤有显著抑制作用，用c(RGDyK)修饰外泌体加载MEG3可有效递送至骨肉瘤细胞。

此外，使用外泌体作为载体递送抑制致癌ncRNA表达的药剂是癌症治疗的另一有效策略。常用方法是基因编辑技术如CRISPR-Cas9系统或RNA干扰（RNAi）可直接靶向敲除或抑制特定ncRNA表达实现基因沉默。CRISPR/Cas9在定位和编辑靶基因方面高效是强大的治疗工具，但实现体内特异性和安全递送仍是重大挑战。将CRISPR/Cas9加载到外泌体中靶向肿瘤部位可显著克服这些限制增强肿瘤凋亡。例如，靶向H91的siRNA包装到外泌体中递送至结直肠癌细胞可显著抑制肿瘤生长验证外泌体靶向递送siRNA抑制ncRNA表达的有效性；使用适配体将siRNA偶联物加载到外泌体中可特异性沉默HISLA表达稳定HIF-1α表达抑制肿瘤代谢重编程；将miR-21抑制剂加载到工程化外泌体中递送至胃癌（GC）细胞与传统转染方法相比显示出更显著的抑制效果和更低细胞毒性；将抗miRNA-21和抗miRNA-10b加载到尿激酶型纤溶酶原激活剂工程化外泌体（uPA-eEVs）中可显著增强肿瘤靶向亲和力与低剂量多柔比星联合治疗表现出协同抗肿瘤效应有效抑制乳腺癌生长和肺转移；将miRNA-BART1-5p拮抗剂转染到外泌体中进行靶向治疗可显著抑制肿瘤组织血管生成诱导细胞凋亡。

在CSC靶向治疗方面，通过利用外泌体工程技术靶向独特CSC标志物可实现更精确的靶向治疗。例如，EpCAM是CSC的关键标志物，通过工程化外泌体特异性识别和靶向表达EpCAM的肝CSC并加载β-catenin特异性siRNA可有效抑制Wnt/β-catenin信号通路显著抑制CSC增殖为肝癌治疗提供新策略；使用电穿孔将抗miR-142-3p基因加载到外泌体中递送至肿瘤部位通过抑制内源性miR-142-3p的表达或功能干扰乳腺癌CSC致瘤性相关信号通路降低体内乳腺癌CSC致瘤潜力抑制恶性肿瘤进展；人肝干细胞（HLSC）来源的外泌体可递送miR-145和miR-200诱导肾CSC凋亡减少CSC增殖、球体形成和侵袭；利用外泌体作为药物递送载体开发工程化外泌体样多孔硅纳米粒子（PSiNPs）作为靶向癌症治疗的药物载体表现出高生物相容性减少免疫排斥其多孔结构允许缓慢释放药物增强治疗效果PSiNPs在广泛癌细胞和CSC中表现出显著的细胞摄取和细胞毒性。总之基于外泌体的CSC靶向策略在改善肿瘤复发、耐药和转移问题方面具有巨大潜力有望实现个性化治疗。

外泌体ncRNA的临床治疗价值主要体现在三个方面：作为无创生物标志物用于早期诊断、预后评估和治疗反应监测；作为治疗干预靶点通过沉默或抑制致癌外泌体ncRNA；作为治疗性ncRNA的递送载体利用其生物相容性和靶向性优势。这些方向为外泌体ncRNA的临床应用提供了重要框架。

总结与展望

最新研究表明ncRNA在介导癌细胞与CSC之间的双向通讯中起关键作用。肿瘤细胞和TME中其他细胞成分将特定外泌体ncRNA递送至CSC增强其干性维持稳态。相反CSC来源的外泌体ncRNA驱动转移进展、血管生成和化疗耐药。这些发现将外泌体ncRNA定位为具有诊断-预后双重效用的有前景的治疗靶点为化疗耐药逆转和精准肿瘤学提供新策略。此外发现CSC利用外泌体ncRNA介导的通路逃避免疫监视和清除为开发CSC靶向免疫疗法提供了机制基础突出了肿瘤免疫编辑中先前未被重视的脆弱性。

尽管靶向CSC及其外泌体ncRNA在肿瘤学中具有变革潜力但五个相互关联的挑战阻碍了临床转化：多因素致癌的内在复杂性限制了仅依赖外泌体ncRNA的治疗效果；阶段特异性外泌体ncRNA表达动态可能损害治疗适应性因此必须构建动态的、多组学为基础的模型整合多水平数据为患者制定个性化靶向治疗计划；尽管外泌体功能具有来源细胞和 cargo依赖性但对ncRNA分选机制、外泌体生物发生/释放动力学和受体细胞摄取特异性的理解仍存在关键空白加上可变的体内生物分布模式需要系统绘制外泌体运输-行为关系；技术障碍包括非标准化分离方案、生产可扩展性问题和功能异质性削弱液体活检可靠性需要标准化纯化流程整合微流控/亲和色谱平台和纳米流式细胞术进行亚群解析；尽管基因工程技术进步但递送效率和CSC特异性仍受共享干细胞信号通路限制需要类器官/PDTX模型优化的靶向策略；尽管临床前有希望但工程化外泌体的长期安全性验证不足强调需要进行严格的临床试验评估稳定性、免疫原性和背景依赖性风险。当前工程化外泌体技术以及靶向CSC的联合治疗策略所取得的进展正逐渐接近临床试验的关键阈值通过深入阐明潜在机制和持续推动技术创新这些研究努力有望在精准肿瘤学领域推动突破性发展。