揭秘乌拉圭人群泌尿生殖道微生态：微生物组、胞内菌群与尿路感染的深层关联

本综述系统阐述了泌尿生殖道微生物组（urobiome）的最新研究进展，强调采用扩展定量尿培养（EQUC）、16S rRNA测序和胞内细菌群落（IBC）检测等多技术手段，首次揭示乌拉圭成年人群泌尿微生物的组成特征及其与性别、症状和IBC的关联，为理解地理文化多样性对微生物生态的影响提供关键证据。

　　

ABSTRACT

长期以来，泌尿系统曾被认为是无菌环境，但近年研究揭示了健康个体中存在多样化的微生物群落，统称为泌尿微生物组（urobiome）。尽管相关研究主要集中于北美、欧洲和亚洲人群，但对拉丁美洲人群的泌尿微生物特征知之甚少。本研究采用扩展定量尿培养（EQUC）、16S rRNA基因测序及胞内细菌群落（IBC）评价策略，对来自乌拉圭的77名成人（40名女性、37名男性，部分伴有尿路感染症状）的泌尿微生物组进行了描述性分析。微生物谱显示其细菌群落组成具有高度多样性，包括以乳酸杆菌属（Lactobacillus）为主和多样化的非乳酸杆菌群落。值得注意的是，许多样本中检测到与健康或疾病密切相关的属，如加德纳菌（Gardnerella）、葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌（Streptococcus）和大肠杆菌（Escherichia）。我们还观察到群落类型与宿主因素（如性别、症状存在与否和IBC）之间的关联。这些发现有助于拓展对人类泌尿微生物组的认识，并强调在描述微生物群落及其健康影响时需考虑地理与文化多样性。

IMPORTANCE

“无菌泌尿 tract”的传统观念已被健康个体尿液样本中复杂微生物群落的发现所挑战。现有大多数关于泌尿微生物组的研究聚焦于北半球人群，导致来自拉丁美洲的数据极为有限。本研究首次利用16S rRNA基因测序描述了乌拉圭成年人群的泌尿微生物组特征。通过分析细菌群落类型与个体元数据之间的关联，我们为这一既往未被充分研究的人群的泌尿微生物多样性和结构提供了新见解。这些结果拓宽了当前对泌尿微生物组的理解，并强调在微生物组研究中纳入多样化人群的重要性，以获得对微生物在健康与疾病中作用的更全面、更具代表性的认识。

INTRODUCTION

人类是一种与多种微生物动态共存的复合生物体（holobiont）。栖息于不同器官和系统的微生物及其遗传物质的总和被称为微生物组（microbiome）。自2009年人类微生物组计划启动以来，我们对人体微生物组的认识取得了巨大进展。绝大多数研究集中于肠道微生物群，探讨其在多种生理和免疫功能中的作用。泌尿系统未被纳入最初的人类基因组计划，因其曾被认为是无菌的解剖部位。对无症状个体尿液样本应用不依赖于培养的研究方法已证明，泌尿系统并非无菌，而是由包括细菌、病毒和真菌在内的多种微生物组成，称为泌尿微生物组（urobiome）。尽管已有若干关于不同健康与疾病状态下泌尿微生物组组成的报道，但目前仍不清楚是否存在与特定状态相关的特定微生物簇。

另一个相关方面是，泌尿微生物组中的部分细菌可在膀胱上皮细胞内以胞内形式存在，这在研究泌尿微生物组时需加以考虑。不依赖于培养的方法，如16S核糖体RNA（rRNA）扩增子测序，能够揭示泌尿微生物组的组成和群落结构。然而，该方法无法区分活菌与死菌，也无法识别其生理和功能。因此，扩展定量尿培养（EQUC）作为一种定量培养方法，被用于补充16S rRNA基因测序。

本研究旨在采用三种不同方法描述健康成人和疑似尿路感染（UTI）个体泌尿生殖道中的微生物。所有样本均进行了16S rRNA基因测序、EQUC以及通过共聚焦显微镜进行的IBC鉴定与表征。这项多参数研究为泌尿微生物组在拉丁美洲这一研究较少人群中的作用提供了新的见解。有必要扩展相关知识以确定其对健康与疾病的贡献。迄今为止，这是首个将IBC纳入泌尿微生物组的研究。

MATERIALS AND METHODS

Population

本研究于2019年至2022年期间自愿招募了两组乌拉圭成人（>18岁）。“无症状”或对照组由在取样前一个月内无任何尿路感染症状/泌尿系统病理/抗生素治疗史的个体组成。症状组包括在乌拉圭Maciel医院或Pereira Rossell中心医院泌尿科门诊治疗的有UTI体征和症状的患者。所有参与者均签署知情同意书，样本均进行编号以匿名化。所有程序均经IIBCE人类研究伦理委员会（CEI-IIBCE-004）和UdelaR（档案号Exp No. 070153-000360-19）评估和批准。本研究遵循国家人类研究法规。

Urogenital samples

清洁中段尿样本由参与者自行收集于120 mL无菌聚丙烯容器中，并立即在实验室冰箱（4°C）中保存；同时分配编号以保护参与者身份。所有操作均在接下来的24小时内完成。中段尿采集被伦理委员会选为优选方法， specifically 以避免对健康志愿者进行侵入性操作。鉴于这种尿液采集方法可能包含来自尿道或生殖道的微生物，推荐使用“泌尿生殖道样本（urogenital sample）”这一术语。

Expanded quantitative urine culture (EQUC)

将100微升尿液接种于不同培养基和环境条件下：（A）麦康凯乳糖琼脂和血琼脂，24–48小时，37°C；（B）血琼脂和巧克力琼脂，24–48小时，37°C，5% CO₂；以及（C）厌氧血琼脂和Man Rogosa Sharpe（MRS）琼脂，24–72小时，37°C，10% CO₂（AnaeroGEN 2.5 L, Thermo Scientific）。然而，在本工作中，我们使用EQUC是为了检测低丰度物种，而非测量菌落形成单位（CFUs）。一旦在平板上观察到菌落，即在相同条件下再次划线以便于-80°C保存，并通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）（Bruker Daltonik Microflex）进行鉴定。

Intracellular bacterial communities (IBC) in urine

IBC通过直接可视化尿液中离心后的细胞进行测定。据此，将1 mL尿液进行细胞离心（380 × g，6分钟）以获得脱落细胞，并用4%多聚甲醛（PFA）固定。载玻片按先前描述的方法用抗尿溶蛋白III（UPIII, Santa Cruz Biotechnology）、小麦胚芽凝集素（WGA, molecular probes）和Hoechst 33341（molecular probes）染色，并用共聚焦扫描激光显微镜（CSLM）观察。此外，为回收和鉴定胞内细菌，进行了庆大霉素处理以杀死所有胞外细菌。简要步骤如下：将14 mL尿液在95 × g下细胞离心5分钟（室温）；弃去上清液；细胞用庆大霉素处理2小时。之后，用Triton X-100裂解细胞以回收胞内细菌，并如前所述使用MALDI-TOF进行鉴定。

DNA extraction

为获得样本中所有微生物的DNA，将5 mL尿液在8,000 rpm下离心15分钟。弃去上清液，将沉淀重悬于250 μL PBS中。样本使用自动Pure Prep32（Molgen）系统，按照PurePrep Pathogen DNA Extraction Kit（Molgen）的说明进行DNA提取。DNA定量使用Qubit dsDNA HS Assay Kit（Thermo Scientific）进行。

16S rRNA sequencing and processing

16S rRNA基因序列文库使用16S Rapid Sequencing Amplicon Barcoding Kit（Oxford Nanopore Technologies—ONT, Oxford, UK, SQK-16S024）制备，遵循ONT描述的标准程序。使用10 μL从尿液样本中纯化的输入DNA、LongAmp Taq 2× Master Mix（New England Biolabs, Ipswich, MA, USA）和试剂盒中包含的带条形码的纳米孔测序引物扩增完整的16S rRNA基因。DNA扩增在Swift ProGene实时PCR热循环仪（ESCO）上进行，程序如下：95°C变性1分钟，35个循环（95°C 20秒，55°C 30秒，65°C 2分钟），最后65°C延伸5分钟。16S rRNA基因扩增子使用Qubit dsDNA HS Assay Kit（Thermo Scientific）进行定量。将等量的各样本扩增子混合，文库随后按制造商说明（略有修改）进行后续处理。首先，进行电泳凝胶以可视化PCR结果。接着，使用自动Pure Prep32系统和PurePrep Pathogen DNA Extraction Kit（Molgen）纯化混合文库。之后，再次进行定量以检查DNA量。所有条形码文库以50–100 fmoles的比例混合于10 μL 10 mM Tris-HCl pH 8.0（含50 mM NaCl）中。随后，向条形码中加入1 μL RAP，室温孵育5分钟。将文库用于加载到MinION Flongle Flow Cell（版本FLO-FLG0001）中。流通池用Flush Buffer和Flush Tether的混合物进行预处理。之后，将5 μL DNA文库与15 μL测序缓冲液II和10 μL加载珠II混合。使用MinIon（Oxford Nanopore Technologies—ONT, Oxford, UK）进行测约24小时。所有序列数据均已上传至美国国家生物技术信息中心（NCBI）的Sequence Read Archive，BioProject ID为PRJNA1247451。

对供体尿液中细菌的分类学鉴定使用EPI2ME（Oxford Nanopore Technologies—ONT, Oxford, UK）的宏基因组学工作流（“What’s in my pot?”）进行，该流程能够对MinKNOW生成的未组装读长进行直接分类学分类。为提高分类学分配的准确性，使用Minimap2 v2.26-r1175过滤序列。获得的结果以逗号分隔值（CSV）文件形式下载，其中识别了每个样本中存在的细菌属和种。然后，使用R（Rstudio v 4.3.3, R Core Team 2024）对EPI2ME 16S工作流输出的CSV文件结果进行进一步分析。

Statistics

使用R中的vegan包（R Core Team 2024）计算Alpha多样性、观察到的丰富度（observed richness）、香农（Shannon）和逆辛普森（inverse Simpson）多样性指数。使用Welch’s t检验检验丰富度的显著性差异，而Kruskal-Wallis检验用于香农和逆辛普森多样性指数。差异丰度分析使用DESeq2包进行检验。共现网络使用NetCoMi包构建。使用R中的Phyloseq包进行进一步过滤，并使用ggplot2包创建图表。

RESULTS

Population

本研究共有77名成人参与，包括40名女性（平均年龄43.3 ± 10.0岁）和37名男性（平均年龄48.0 ± 14.8岁）。各人群又根据是否存在UTI症状进行划分：有症状组（22名女性，平均年龄47.2 ± 6.65岁/17名男性，平均年龄56.5 ± 14.6岁）和无症状对照组（18名女性，平均年龄39.9 ± 13.1岁和20名男性，平均年龄40.8 ± 10.9岁）。老年人定义为>60岁，该组包括7名男性（6名有症状，平均年龄69.8 ± 6.65岁）和5名女性（平均年龄62.8 ± 2.77岁）。由于没有关于绝经状态的记录，我们决定将>55岁的女性进行分层，观察到6例，其中3例有UTI症状，3例无症状，但均存在IBC。

EQUC

扩展尿培养揭示了从男性和女性中分离的微生物存在一些差异。男性中最常见的微生物是溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）、大肠杆菌（Escherichia coli）和奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）（相对频率分别为0.22、0.18、0.09、0.09和0.065）。在无症状男性中，以表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌为主，而在有症状男性中，更常见的是粪肠球菌和大肠杆菌。

在女性人群中，最常见的微生物是大肠杆菌，其次是溶血葡萄球菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌和奇异变形杆菌（相对频率分别为0.19、0.13、0.07和0.06）。在无症状女性中，观察到葡萄球菌属（Staphylococcus spp.）的多样性很高，以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主，这与无症状男性中的观察一致。在有症状女性中，大肠杆菌是最常分离到的微生物，其次是粪肠球菌和奇异变形杆菌。

EQUC能够回收正常尿培养无法回收的大量多样性微生物，如在女性人群中观察到乳酸杆菌属（Lactobacillus spp.）（所有物种的相对频率为0.071）和不同的葡萄球菌物种（相对频率为0.305）。这两类微生物很少从男性尿液中回收。然而，在男性人群中，溶血葡萄球菌的比例高于女性，但其他物种的多样性范围较低。相反，更多的链球菌属（Streptococcus spp.）从男性尿液中回收，以及其他仅存在于男性的物种，如鲁氏不动杆菌（Acinetobacter iwoffii）、节杆菌属（Arthrobacter spp.）、短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）、微小杆菌属（Exiguobacterium spp.）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）和齿垢韦荣球菌（Veillonella denticariosi）。

IBC

使用依赖于培养的方法来分离和鉴定胞内细菌，这些细菌也通过CSLM进行了可视化和确认。在14名有症状女性、9名无症状女性、9名有症状男性和5名无症状男性中检测到胞内细菌，占总成人的48%。其余52%无胞内细菌的人群包括8名有症状女性、9名无症状女性、8名有症状男性和15名无症状男性。

最常检测到的胞内物种包括大肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、溶血葡萄球菌和粪肠球菌，且各组间存在显著差异。例如，大肠杆菌更常见于有症状个体，尤其是女性。嗜麦芽窄食单胞菌和溶血葡萄球菌分别在男性和无症状男性中更普遍。其他几种物种，如腐生葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus）和奇异变形杆菌，出现频率较低且存在于特定组别。这些发现表明有症状与无症状个体以及女性与男性之间的胞内细菌群落可能存在差异。

有症状女性中的IBC病原体主要是大肠杆菌（8/14例，57%），其次是奇异变形杆菌（2/14，14%）、嗜麦芽窄食单胞菌、腐生葡萄球菌、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）和阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）（各1/14，7%）。在无症状但存在IBC的女性中，病原体更加多样化。大肠杆菌仅在两例中检测到，其他各物种仅在一例中观察到（粪肠球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、溶血葡萄球菌、头状葡萄球菌（Staphylococcus capitis）、人葡萄球菌（Staphylococcus hominis）、山羊葡萄球菌（Staphylococcus caprae）和彭氏变形杆菌（Proteus penneri））。在有症状且存在IBC的男性中，粪肠球菌和嗜麦芽窄食单胞菌是最常见的病原体（各3例，3/9，33%）。其次是大肠杆菌、可变克雷伯菌（Klebsiella variicola）和地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）（各一例）。最后，在无症状但存在IBC的男性组中，回收到溶血葡萄球菌（3/5，60%），其次是大肠杆菌和粪肠球菌（各一例）。

Urogenital microbiome diversity

为评估研究人群中泌尿生殖道微生物组的多样性，我们使用观察到的丰富度、香农指数和逆辛普森指数评估了Alpha多样性。

所有男性和女性之间未发现显著差异。然而，当比较有症状和无症状个体时，在多个多样性指数上观察到显著差异，有症状个体表现出显著更高的丰富度和多样性（观察到的丰富度：P < 0.01；香农指数：P < 0.001；逆辛普森指数：P < 0.0001）。

相反，在比较有和无IBC的个体时，未检测到显著差异。在无症状个体中，女性表现出比男性显著更高的丰富度（P < 0.01），而在有症状男性和女性之间未观察到显著差异。

最后，当比较有症状和无症状女性时，在香农指数和逆辛普森指数上发现显著差异（分别为P < 0.01和P < 0.0001）。这些结果表明，泌尿生殖道微生物组的多样性受症状状态的影响，但不受性别本身或胞内细菌群落存在的影响。

Urogenital microbiome composition

所有样本中泌尿生殖道微生物组的组成如图4所示。在整个女性人群中，卷曲乳酸杆菌（Lactobacillus crispatus）、惰性乳酸杆菌（Lactobacillus iners）、产丙酸戴阿利斯特菌（Dialister propionicifaciens）、大肠杆菌、肠杆菌属（Enterobacter spp.）和葡萄球菌属（Staphylococcus spp.）是最丰富的微生物。在无症状女性中，卷曲乳酸杆菌和惰性乳酸杆菌的比例较高，而在有UTI症状的女性中，该属的成员消失。大肠杆菌是有症状女性中最丰富的属，其次是肠杆菌属。在男性人群中，观察到与女性不同的其他物种，如Musicola spp.、Peptoniphilus spp.、Pantoea spp.和Dialister spp.。在无症状男性中，富含Peptoniphilus coxii和惰性乳酸杆菌，而在有症状男性中，观察到Musicola paradisiaca、Pantoea delayi、Anaerostipes spp.和Anaerococcus spp.。

当分析涉及IBC存在与否的泌尿生殖道微生物组时，在无IBC的女性中，卷曲乳酸杆菌、阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）、惰性乳酸杆菌、四川肠杆菌（Enterobacter sichuanensis）和大肠杆菌是最丰富的属。在存在IBC的女性中，Dialister spp.、惰性乳酸杆菌、大肠杆菌和葡萄球菌属是主要属。在无IBC的男性中，也观察到惰性乳酸杆菌，但Peptoniphilus spp.、Anaerococcus spp.和Anaerostipes spp.是该组个体中更丰富的分类群。在存在IBC的男性人群中，观察到Musicola spp.、Pantoea spp.、Yokonella spp.、Erwinia spp.和Peptoniphilus spp.等。

对不同年龄的泌尿生殖道微生物组组成的分析揭示了与年龄和症状存在相关的差异。在55岁以下无症状女性中，微生物组以杆菌纲（Bacilli）（相对丰度39.4%）为主，其中乳酸杆菌（卷曲乳酸杆菌和惰性乳酸杆菌）是最丰富的物种。相反，有症状女性中杆菌纲减少，而γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）增加，其中包括肠杆菌目（Enterobacterales）成员（埃希氏菌属Escherichia 13.5%）和伯克霍尔德氏菌目（Burkholderiales）成员（无色杆菌属Achromobacter和罗尔斯顿菌属Ralstonia 15.7%）。在绝经后女性（考虑>55岁）中，样本量有限，仅6例（3例有症状，3例无症状）。该组微生物组也以γ-变形菌纲为主，罗尔斯顿菌属、嗜麦芽窄食单胞菌属、埃希氏菌属、无色杆菌属和肠杆菌属最为丰富。在杆菌纲中，卷曲乳酸杆菌是最丰富和最具代表性的物种。

在无症状男性中，微生物组除杆菌纲和γ-变形菌纲外，还显示出其他纲，如α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）和拟杆菌纲（Bacteroidia）。在有症状男性中，γ-变形菌纲（相对丰度44.8%）和杆菌纲增加，与无症状男性相比，出现了芽孢杆菌属（Bacillus）以及乳酸杆菌属。在老年男性组（>60岁，n = 7，6名有症状，均存在IBC）中，最丰富的纲再次是γ-变形菌纲，其目（如伯克霍尔德氏菌目、肠杆菌目和黄单胞菌目Xanthomonadales）在最丰富的10个分类群中占据突出地位。

最后，按性别、症状和IBC存在情况划分的细菌纲分布如图7所示。在纲水平上获得了最显著的丰度差异。在所有组别中，放线菌纲（Actinobacteria）、γ-变形菌纲、杆菌纲和拟杆菌纲表现为最丰富的纲。值得注意的是，男性表现出更高的放线菌纲相对丰度，而女性则在多个细菌纲（即杆菌纲和γ-变形菌纲）之间表现出更均衡的分布。

有症状男性人群显示出γ-变形菌纲的丰度显著增加，而有症状女性人群与无症状个体相比，显示出杆菌纲的丰度显著降低，证实了这些细菌群落与泌尿系统状况之间的联系。此外，存在胞内细菌群落的个体显示出微生物组组成的变异，其中γ-变形菌纲是优势分类群。

无症状且无IBC的女性群体中的核心微生物主要由杆菌纲（即乳酸杆菌属和葡萄球菌属）组成，其次是γ-变形菌纲（即大肠杆菌）。即使当症状或IBC出现时，γ-变形菌纲的比例显著增加，而杆菌纲的数量减少。在男性中也观察到相同现象，但每个纲中的属不同。

DISCUSSION

尿路感染（UTIs）是最常见的细菌感染之一，主要影响女性，近50–60%的女性一生中至少经历一次发作。女性易感性增加主要归因于解剖学因素，如尿道较短、靠近肛门、性活动、激素变化和妊娠等。然而，并非所有因素都有实验证据支持。尿路病原体在胞内细菌群落（IBC）中的持续存在以及保护性微生物物种（如乳酸杆菌属）的破坏，已被牵涉到UTIs的发病机制中，这凸显了对针对微生物组的治疗策略的需求。理解泌尿微生物组与宿主防御机制之间的相互作用对于开发有效的、个性化的UTI预防和治疗方法仍然至关重要。“尿液无菌”的范式在过去二十年中因不同的发现而改变，这些发现与支持健康和症状个体中存在多样化泌尿微生物组的证据相一致。

Urogenital microbiome composition and sex differences

尿液样本采集方法会影响泌尿微生物组的组成，因此在比较不同研究时应加以考虑。本研究中，样本采用中段尿技术采集；因此，在分析泌尿微生物组组成时应考虑来自尿道和生殖道的微生物的存在。不同的报告说明了皮肤微生物存在于男性泌尿微生物组中，而生殖器微生物则出现在女性中。尽管人体不同部位的多种微生物组已被广泛研究，并且已知它们在许多方面存在差异，但它们不能被视作完全独立的。此外，已证明不同的微生物群相互沟通并协调行动，最终影响人类健康。在泌尿系统中，年龄、性别和激素状态等不同变量会影响泌尿微生物组的微生物组成。

在健康的男性和女性人群中，泌尿微生物组的丰度和多样性低于其他微生物组。本报告观察到男性和女性之间泌尿生殖道微生物组组成的差异，特别是在细菌多样性和相对丰度方面，尽管未检测到显著差异。虽然大肠杆菌被发现在有症状女性中占主导地位，但有症状男性表现出更异质性的微生物组，包括Musicola spp.、Pantoea spp.和Anaerostipes spp.。这些发现与先前显示基于性别的微生物组差异的研究一致，可能受激素因素和宿主免疫反应的影响。此外，无症状女性表现出更高的乳酸杆菌属丰富度，支持了它们针对尿路病原体的 proposed 保护作用。

尽管存在这些差异，年龄是另一个可能影响泌尿微生物组组成的因素。已表明，在60岁以上的男性和绝经后女性中，观察到泌尿微生物组组成的变化。在健康男性中，乳酸杆菌属、链球菌属、棒状杆菌属（Corynebacterium）、葡萄球菌属和厌氧球菌属（Anaerococcus）的存在被报道为男性泌尿生殖道微生物群的一部分。相反，在患有UTI的男性中，出现其他微生物，如大肠杆菌、尿气球菌（Aerococcus urinae）、沙氏放线杆菌（Actinobaculum schaalii）和粪肠球菌等，且缺乏乳酸杆菌。有趣的是，我们未能在本研究男性UTI样本中检测或回收到气球菌属和放线杆菌属。关于乳酸杆菌属，我们在老年男性中观察到它们的存在；然而，该人群规模太小，无法得出强有力的结论。此外，我们的队列中位年龄约为46岁，低于参考文献中研究的人群（≥60岁）。当我们专门重新检查7名>60岁男性的测序数据时，未发现气球菌属或放线菌属（Actinotignum spp.），并且这些属在年轻男性参与者中也缺失。

在女性中，有益微生物（如乳酸杆菌属）的比例随着绝经而下降，这可能与激素变化有关。值得注意的是，大多数泌尿微生物组研究是在欧洲、美国和中国进行的，评估拉丁美洲女性泌尿微生物组演变的报告很少。在这里，我们仅描述了六名绝经后女性泌尿生殖道微生物组的组成，其中50%出现UTI症状。尽管这是一个小样本，但我们发现无症状绝经后女性尿液中有卷曲乳酸杆菌。鉴于样本量小，这一发现应谨慎解释，但它可能与地理分布或文化差异有关。

Role of Lactobacilli and Staphylococcus in urinary health

在本工作中，乳酸杆菌属，特别是卷曲乳酸杆菌和惰性乳酸杆菌，在无症状女性中高度丰富，而在有症状个体或存在IBCs的个体中较少见。特别是，卷曲乳酸杆菌被发现与健康、无症状且无IBC的女性相关。此外，EQUC能够从尿液中回收这种微生物，证实了其在尿液中的存活能力。卷曲乳酸杆菌已被报道为健康女性泌尿微生物组和阴道微生物组的一部分。这些结果也支持了泌尿微生物组的起源可能是其他最近的微生物群，如阴道或肠道微生物群，甚至是皮肤的观点，而且更有趣的是，微生物组是相互连接的。在这里，我们还观察到惰性乳酸杆菌存在于有IBC的女性以及一些男性中，他们均无症状。惰性乳酸杆菌在健康女性中被观察到，而其他乳酸杆菌，如加氏乳酸杆菌（L. gasseri），在患有尿失禁的女性中被观察到。乳酸杆菌通过竞争性排斥和抗菌物质 production 促进泌尿 tract 健康的假设得到了这一发现的加强。

类似地，葡萄球菌属，包括溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌，在两种性别中均常见检测到，表明其可能具有共生作用，并在致病条件下发生转变。值得注意的是，这些物种也在胞内检测到，引发了关于它们在持续性或复发性感染中潜在作用的问题。本工作中观察到一组多样化的葡萄球菌物种，包括10种不同的可培养物种。其他作者也报道了类似的发现，但这些微生物在泌尿微生物组中的相关性仍不清楚。此外，最近有报道称，从皮肤分离的不同葡萄球菌可以产生神经递质（NT）。表皮葡萄球菌是正常皮肤微生物群的一部分，其产生NT的作用的影响需要探讨。关于葡萄球菌属在膀胱中产生NT的能力知之甚少，但评估不同菌株产生NT并调节脑-肠-膀胱轴的潜力将很有趣。

Intracellular bacterial communities and their implications

研究人群中近一半确认存在IBCs，且在有症状个体中检出率更高。在先前的工作中，观察到IBC存在、UTI症状和女性之间存在显著关联。在这里，关联不显著，可能是由于人群规模所致。大肠杆菌是最常检测到的胞内病原体，尤其是在有症状女性中，这与其已知的形成IBCs并导致