土耳其人畜共患戊型肝炎病毒储存库的变化：一种新的潜在公共卫生威胁？

《Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases》：The changing reservoir of the zoonotic Hepatitis E virus in Türkiye: A novel potential threat to public health?

本研究在土耳其农村地区对野生鼠类（Microtus属）和人群血液样本中的HEV RNA进行检测。结果显示，16%人类样本（8/50）和1.5%鼠类样本（6/391）携带HEV基因型3，其序列与猪源性HEV高度同源（97.6-98.6%），但与已知鼠类HEV形成独立系统发育分支。研究证实野生鼠类可能参与HEV跨物种传播，为无猪产业地区HEV流行提供新证据。

　　猪是全球范围内乙型肝炎病毒（HEV）的主要宿主，尤其与人畜共患病的HEV基因型3密切相关。然而，在没有猪肉产业或猪肉消费习惯的国家，基因型3 HEV是否能够适应其他物种并成为新的传播途径，仍是一个存在争议的问题。本研究旨在探讨野生啮齿类动物是否可能成为HEV的新宿主或潜在的疾病传播媒介。通过采集来自农村地区附近的啮齿类动物样本以及在这些地区生活的人群的血液样本，我们对HEV RNA进行了检测和分析，并对发现的病毒株进行了序列分析和分子特征研究，同时构建了系统发育树。研究结果显示，在50份人类血液样本中有8份（16%）检测到HEV RNA，在391份啮齿类动物样本中有6份（1.5%）检测到HEV RNA。这些病毒株与NCBI数据库中的参考序列进行比对后，均被鉴定为HEV基因型3。研究发现，啮齿类动物和人类来源的HEV序列在基因水平上具有97.6%-98.6%的相似性。此外，参考的啮齿类动物HEV株形成了与研究样本不同的系统发育分支，并且聚集在Rocahepevirus组内。这些结果表明，野生小型哺乳动物可能在基因型3 HEV的流行病学中扮演重要角色，因此应被视为潜在的疾病宿主。为了更好地监测和控制HEV感染，保障公共健康，需要多学科的协作，即“One Health”方法。

HEV感染是一种全球性的、具有传染性的、人畜共患病的疾病，它可以导致人类急性肝炎，甚至发展为肝衰竭。目前，HEV仍然是全球范围内重要的公共卫生问题，每年造成超过300万例症状性感染，7万例死亡和3000例死产。HEV能够感染人类以及多种哺乳动物宿主，其基因组结构较为简单，包含一个较短的5'非翻译区（UTR），三个不连续且部分重叠的开放阅读框（ORFs），以及一个较短的3'非翻译区，后者以多聚腺苷酸尾结束。ORF1编码非结构蛋白，其中包括RNA依赖的RNA聚合酶。ORF2编码衣壳蛋白，而ORF3编码一种小的、具有免疫原性的磷酸蛋白，该蛋白与细胞骨架相关。ORF2和ORF3的重叠区域是HEV研究的重点区域，也是所有HEV分离株中最保守的部分。HEV属于Hepeviridae病毒科，其中包含一个Orthohepevirinae亚科。该亚科包括Paslahepevirus、Avihepevirus、Rocahepevirus和Chirohepevirus四个属。HEV具有单链正链RNA结构，根据其遗传特征可以分为多个基因型，其中一些基因型还可以进一步细分为亚型。Paslahepevirus属的成员已被归类为8个不同的基因型，包括HEV基因型1到8。HEV基因型1和基因型2主要局限于人类感染，并且通常与卫生条件较差的发展中国家的疫情相关。而HEV基因型3和基因型4则在工业化国家中较为常见，它们负责在人类、猪和兔子之间传播乙型肝炎。HEV基因型5和基因型6仅在日本的野猪中被检测到，HEV基因型7则出现在单峰骆驼中，HEV基因型8则出现在中国的骆驼中。Avihepevirus和Chirohepevirus包括非人畜共患病的物种，如鸟类和蝙蝠，而Rocahepevirus则在啮齿类动物中被发现。此外，Rocahepevirus也在食肉动物中被检测到。

HEV最初是在家猪中被发现的，家猪被认为是基因型3和基因型4 HEV的主要宿主。从猪中分离的传染性HEV株可能对人畜共患病的传播构成潜在的公共卫生威胁。实验感染模型显示，基因型3 HEV可以在猪和兔子之间传播，但不能在猪和啮齿类动物之间传播。此外，使用基因改造小鼠进行研究时，将基因型1和基因型3 HEV注射到嵌合小鼠中，导致了强烈的HEV感染。作为另一个跨物种传播的例子，对恒河猴和黑猩猩进行的实验性感染显示，猪源的基因型3 HEV可以在这些动物中传播。此外，通过实验性给羊和鼠接种人类HEV基因型3分离株，也实现了跨物种传播。然而，由于实验动物模型的种类较为有限，基因型3 HEV的流行病学和致病机制尚未完全阐明。

HEV在不同动物物种中的存在表明了跨物种传播的可能性，以及新型宿主动物的出现。尽管科学证据表明HEV是一种人畜共患病，猪是其主要宿主，但基因型3 HEV也可能适应其他动物物种。目前，关于HEV基因型3感染的生物学特性、致病机制、传播途径以及人畜共患病关系的研究，在没有猪养殖和猪肉消费习惯的国家仍然较为缺乏。此外，全球范围内的研究主要集中在猪身上，而对其他动物物种的研究通常仅限于实验研究。因此，揭示HEV的生物学和生态特性，并调查其宿主，对于应对HEV感染具有重要意义。

本研究旨在调查在土耳其农村地区附近捕获的野生啮齿类动物中是否存在HEV基因型3，以及在这些地区生活的人群中是否也存在该病毒。通过分析这些样本，我们希望揭示啮齿类动物和人类来源的HEV株之间的遗传关系。研究的样本包括来自土耳其Atatürk大学医学院研究医院的50份血液样本，这些样本是从通过ELISA检测确认为HEV-IgM和/或IgG阳性的个体中随机选取的。这些血液样本在+4°C下以2000 rpm的速度离心10分钟，然后将血浆和白细胞层转移到1.5 ml的试管中，并在-20°C下保存，直到提取。另一组样本则是来自这些地区的野生啮齿类动物，样本数量为391份，其中包含了Microtus spp.这一属的物种。这些样本来自与人类栖息地相近的环境，并且在该地区广泛分布。通过分析这些样本，我们发现了HEV RNA的存在，并进一步进行了序列和系统发育分析。系统发育树的构建显示，Orthohepevirinae亚科分化为四个属（见图2）。而猪、人类和兔子的HEV株则显示出不同的系统发育特征。

研究结果表明，在没有猪养殖和猪肉消费习惯的地区，HEV基因型3仍然可能通过其他宿主动物传播给人类。这一发现对于理解HEV的传播机制和制定有效的防控措施具有重要意义。通过揭示野生啮齿类动物作为潜在宿主的可能性，我们可以更全面地评估HEV的生态分布和流行趋势。此外，研究还表明，不同物种之间的HEV传播可能受到多种因素的影响，包括宿主的生理特征、病毒的适应能力以及环境条件等。因此，对于HEV感染的防控，不仅需要关注猪这一主要宿主，还应加强对其他可能宿主动物的监测和研究。

本研究的实施得到了土耳其Atatürk大学医学院临床研究伦理委员会的批准，批准编号为2022/B.30.2.ATA.0.01.00/676。同时，该研究也获得了土耳其共和国农业和林业部自然与国家公园总署的批准，批准编号为2022/E-21264211–288.04–7706572。此外，本研究得到了土耳其科学与技术研究委员会（TUBITAK）的资助，资助编号为222S223。这些支持为本研究的顺利进行提供了保障，使得我们能够在有限的资源下完成对HEV在不同宿主动物中的传播情况的调查。

在研究过程中，我们采用了多种方法和技术，以确保结果的准确性和可靠性。首先，我们对样本进行了HEV RNA的检测，包括人类血液样本和啮齿类动物的肝脏、肺部和脾脏组织。其次，我们对检测到的病毒株进行了序列分析和分子特征研究，以确定其遗传特性。最后，我们构建了系统发育树，以比较不同宿主动物之间的HEV株的进化关系。这些方法的应用使得我们能够全面了解HEV在不同宿主中的传播情况，并为后续的防控措施提供科学依据。

此外，本研究还涉及对样本来源的详细记录和分析。我们对人类样本的采集和处理进行了严格管理，以确保样本的代表性和研究的科学性。同时，我们对啮齿类动物的采集地点和生活环境进行了调查，以了解它们与人类的接触情况。这些信息对于分析HEV的传播途径和宿主适应性具有重要意义。通过结合这些数据，我们能够更准确地评估HEV在不同宿主动物中的分布情况，并为制定针对性的防控策略提供支持。

研究结果的发现不仅具有重要的科学价值，还对公共卫生管理具有实际意义。在没有猪养殖和猪肉消费习惯的地区，HEV的传播途径可能与猪不同，因此需要特别关注其他潜在宿主动物的感染情况。通过加强对这些动物的监测，我们可以更好地预测HEV的流行趋势，并采取相应的防控措施。此外，研究还表明，不同宿主动物之间的HEV传播可能受到多种因素的影响，包括病毒的适应能力、宿主的免疫反应以及环境条件等。因此，为了全面了解HEV的传播机制，需要多学科的协作，即“One Health”方法，以整合人类、动物和环境健康的数据。

在研究过程中，我们还考虑了伦理和合规问题。所有样本的采集和处理均遵循相关伦理规范，确保了研究的合法性和科学性。此外，我们对实验动物的使用进行了严格管理，以减少对动物的伤害，并确保实验的道德标准。通过这些措施，我们能够在保障动物福利的前提下，完成对HEV在不同宿主中的传播情况的调查。

本研究的成果为进一步研究HEV的传播机制和防控措施提供了重要的数据支持。通过揭示野生啮齿类动物作为潜在宿主的可能性，我们可以更全面地理解HEV的生态分布和流行趋势。此外，研究还表明，不同宿主动物之间的HEV传播可能受到多种因素的影响，包括病毒的适应能力、宿主的免疫反应以及环境条件等。因此，为了更好地应对HEV感染，需要加强对不同宿主动物的监测和研究，并制定相应的防控措施。

研究还强调了多学科协作的重要性。HEV的防控不仅需要病毒学专家的参与，还需要公共卫生专家、生态学家、兽医以及动物饲养者等多方面的合作。通过整合不同领域的知识和资源，我们可以更全面地了解HEV的传播机制，并制定有效的防控策略。此外，研究还表明，HEV的传播可能受到社会、经济和环境因素的影响，因此需要综合考虑这些因素，以制定更加全面的防控措施。

总之，本研究通过分析野生啮齿类动物和人类样本中的HEV RNA，揭示了HEV在不同宿主中的传播情况，并为HEV的防控提供了新的视角和数据支持。研究结果表明，野生小型哺乳动物可能在HEV的流行病学中扮演重要角色，因此应被视为潜在的疾病宿主。通过多学科的协作，我们可以更好地监测和控制HEV感染，保障公共健康。此外，研究还强调了加强对不同宿主动物的监测和研究的重要性，以更全面地了解HEV的传播机制和防控策略。这些发现不仅具有科学价值，还对公共卫生管理具有实际意义，为未来的研究和防控工作提供了重要的参考。